用進化工程方法進行蝦青素高產(chǎn)株的選育.pdf

1、蝦青素是一種高附加值的酮式類胡蘿卜素，具有極強的淬滅活性氧和清除氧自由基的能力，在食品、醫(yī)藥、養(yǎng)殖業(yè)等方面有廣闊的應用前景。利用紅法夫酵母生產(chǎn)蝦青素，具有發(fā)酵周期短，易于實現(xiàn)高密度培養(yǎng)等特點而受到廣泛關(guān)注。本文利用進化工程的方法對紅法夫酵母進行育種，篩選高產(chǎn)菌株。
　　 本文利用紅法夫酵母野生菌株As2.1557經(jīng)過兩輪基因組重排得到的產(chǎn)蝦青素高產(chǎn)株F2-11作為出發(fā)菌株，經(jīng)過紫外線和亞硝基胍復合誘變，構(gòu)建出用于進化培養(yǎng)的多性狀

2、親本庫，同時研究了各種產(chǎn)生活性氧的物質(zhì)對菌群的抑制情況，確定了用于進化培養(yǎng)的篩選壓力。分別為：NaClO：0.2％；H2O2：0.1％：MB：10-5mol/L：TiO2：300mg/L。通過實驗計算了所選菌株的代時為5.34h。將經(jīng)過復合誘變后的親本庫置于裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：接種量為10％，搖床轉(zhuǎn)速為150 rpm，培養(yǎng)溫度22℃。培養(yǎng)至對數(shù)期添加各種抑制劑，進入進化培養(yǎng)階段，連續(xù)培養(yǎng)30代。隨后研究了誘變菌群

3、對環(huán)境適應性和蝦青素含量及產(chǎn)量的問題。與出發(fā)菌株相比，經(jīng)過進化培養(yǎng)的菌株顯示出較強的適應性，蝦青素含量和產(chǎn)量也有明顯增加。經(jīng)涂布平板，挑出體積較大、顏色較紅的菌落，置于96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，進行蝦青素高產(chǎn)株的篩選。測定其產(chǎn)量，選出最高的一株TiO2-17，產(chǎn)量達到1.98mg/L。比出發(fā)菌株F2-11(1.83mg/L)提高8.4％。
　　 論文還探索了利用RGB顏色傳感器，快速檢測菌落中色素含量的方法。擬合出蝦青素含量與R、