雨生紅球藻蝦青素酯的純化、活性研究及不同蝦青素的鑒定.pdf

1、蝦青素是一種萜烯類的類胡蘿卜素，具有良好的著色功能和極強的生物活性。不同來源的蝦青素由不同的同分異構體組成，其活性之間也存在較大差別。雨生紅球藻是天然蝦青素的主要來源，其蝦青素主要以蝦青素酯的形式存在。但由于蝦青素酯結構的復雜性及傳統(tǒng)分離純化方法的局限性，目前高效分離純化蝦青素酯的研究尚不多見。本論文使用高速逆流色譜（HSCCC）分離純化雨生紅球藻蝦青素酯，應用 HPLC和 ESI-MS進行結構鑒定，進一步研究蝦青素酯的生物活性，并建立

2、鑒定不同來源蝦青素的方法，主要實驗結果如下：
　?。?）以總類胡蘿卜素含量為指標，通過單因素和正交試驗設計，優(yōu)化得到雨生紅球藻中類胡蘿卜素提取的最佳條件為：破壁溫度50 oC、破壁時間30 min、纖維素酶濃度0.6 mg/mL、酶反應 pH4.0，優(yōu)化后提取物中總類胡蘿卜素的含量高達59.62±0.31 mg/g DW，比優(yōu)化前提高了25％。
　?。?）應用正己烷-乙腈-甲醇（4:1:2，v/v/v）和正己烷-甲醇（2:1

3、，v/v）兩種溶劑體系，首次利用高速逆流色譜（HSCCC）技術從100 mg雨生紅球藻粗提物中分離純化得到角黃素（10.35 mg）、蝦青素十六碳二烯酸單酯（8.47 mg）、蝦青素亞麻酸單酯（15.65 mg）、蝦青素亞油酸單酯（6.05 mg）、β-胡蘿卜素（15.25 mg）、蝦青素棕櫚酸-二十二碳二烯酸雙酯（4.33 mg）。
　?。?）以蝦青素和維生素 E為對照，研究蝦青素單酯的抗氧化活性。結果表明，蝦青素單酯清除ABT

4、S+、·OH自由基的EC50值分別為7.09±0.20μg/mL和11.08±0.76μg/mL，清除能力強于維生素 E，但弱于蝦青素；對油脂過氧化具有一定的抑制作用；具有一定的鐵離子還原能力，其FRAP值為0.236±0.021 mmol/L。以熊果苷和奧利司他為對照，測定了蝦青素單酯對蘑菇酪氨酸酶和胰脂肪酶的抑制作用。結果表明，當蝦青素單酯濃度為800μg/mL時，對蘑菇酪氨酸酶的抑制率為39.48%；蝦青素單酯對胰脂肪酶有較好的抑

5、制作用，IC50值為9.85±0.02μg/mL。
　?。?）使用YMC Carotenoid C30(4.6×250 mm)色譜柱，采用單因素試驗法優(yōu)化得到分離蝦青素異構體的最佳 HPLC條件。樣品濃度：5 mg/mL，進樣量：20μL，流速：1.0 mL/min，柱溫：35 oC，檢測波長：474 nm，流動相：甲醇-乙腈-MTBE。在此基礎上建立了一種鑒定不同來源蝦青素的方法。
　　本論文的實驗結果為蝦青素酯的大量制備