IPP異構(gòu)酶基因遺傳轉(zhuǎn)化對(duì)雨生紅球藻蝦青素含量影響的研究.pdf

1、蝦青素是一種抗氧化活性極強(qiáng)的類胡蘿卜素，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。雨生紅球藻是自然界蝦青素含量最高的生物，能在逆境脅迫條件下大量合成并積累蝦青素，其蝦青素積累量可高達(dá)細(xì)胞干重的4％。但生物量提高與蝦青素積累的矛盾限制了蝦青素的規(guī)模化生產(chǎn)，因此通過基因工程手段改造雨生紅球藻的生物學(xué)特性，提高其生長速度和蝦青素含量具有重要意義。
　　 本研究克隆了蝦青素合成過程中的關(guān)鍵酶——IPP異構(gòu)酶基因，利用建立的農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化體系和基因槍法將ipi

2、Hp1基因?qū)胗晟t球藻細(xì)胞內(nèi)，分析過表達(dá)IPP異構(gòu)酶基因的雨生紅球藻株生物量及蝦青素含量的變化。主要研究成果如下:
　　 1.建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的雨生紅球藻遺傳轉(zhuǎn)化的篩選體系，將外源熒光蛋白egfp基因轉(zhuǎn)入雨生紅球藻體內(nèi)并成功表達(dá)。檢測(cè)了轉(zhuǎn)化子的生物量和蝦青素含量，結(jié)果表明與野生型雨生紅球藻無顯著性差異，證明該方法可用于后續(xù)的雨生紅球藻基因工程改造。
　　 2.利用RT-PCR技術(shù)克隆了ipiHp1基因，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法

3、將雙元載體pCAMBIA3300-egfp-ipiHp1轉(zhuǎn)入雨生紅球藻體內(nèi)，鑒定表明ipiHp1基因已整合到轉(zhuǎn)化子的基因組DNA中，同時(shí)檢測(cè)了轉(zhuǎn)化株蝦青素含量的變化，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化株A3的蝦青素含量與野生型有顯著差異(P＜0.05)，平均值達(dá)到16.49mg/g，比野生型提高了5.16％，為構(gòu)建高產(chǎn)蝦青素的基因工程藻株奠定了基礎(chǔ)。
　　 3.構(gòu)建了基因槍轉(zhuǎn)化載體pBlueScript SKⅡ-bar-egfp-ipiHp1，利用基