葡萄1--氨基環(huán)丙烷--1--羧酸合酶基因的克隆和表達分析.pdf

1、分類號：密級：學校代碼：10165學號：201111217遣掌師耗大學碩士學位論文@葡萄卜氨基環(huán)丙烷1羧酸合酶基因的克隆和表達分析作者姓名：學科、專業(yè)：研究方向：導師姓名：初雪鵬遺傳學植物發(fā)育與分子生物學侯和勝教授2014年03月遼寧師范大學碩士學位論文摘要ACC合成酶(1一氨基環(huán)丙烷一l一羧酸合酶，ACS)是植物乙烯合成中的關鍵酶。本研究以歐洲葡萄為材料，以ACS基因為研究對象進行了研究，結果如下：1對CTAB法、改良SDS法和Tri

2、zol法提取葡萄RNA進行了比較。結果表明CTAB法和改良SDS法都能提取到葡萄RNA。前者提取到的RNA質量好，無污染和降解；后者則產(chǎn)量高，但有蛋白質和DNA的污染，并有些降解；Trizol法無法提取獲得葡萄RNA，可能是受試劑中胍鹽的影響。利用CTAB法從不同組織中提取葡萄RNA，反轉錄后克隆得到VvACS3、VvACS4和VvACS53個基因。對這3個基因推導的氨基酸序列進行分析。結果表明：這3個基因均具有AATlike保守結構域

3、。且有多處能被磷酸化修飾的位點，說明了VvACS在翻譯后的修飾階段易被磷酸化，可能與ACS活性有關。將實驗室已克隆到的6個VvACS基因推導的氨基酸序列與番茄、擬南芥和玉米的ACS蛋白的氨基酸序列進行比對，并構建系統(tǒng)發(fā)生樹。結果顯示：這些VvACS具有不同程度的相似性和同源性。為進一步定性研究VvACS基因提供參考。2對葡萄葉片進行乙烯、脫落酸處理和傷害誘導后，利用實時定量PCR對VvACS5基因相對表達量進行研究。發(fā)現(xiàn)外源乙烯和脫落酸

4、都能先促進后抑制VvACS5的表達；傷害處理對M跚的表達具有促進作用。說明VvACS5能響應這些脅迫處理。這一發(fā)現(xiàn)初步證明ACS參與植物對脅迫的調控。3為進一步分析VvACS5基因的功能，構建了VvACS5基因植物雙元表達載體，通過農(nóng)桿菌介導轉化擬南芥。本研究采用了浸花法進行轉化。通過PCR方法和抗生素篩選初步驗證，葡萄VvACS5基因成功的轉到擬南芥基因組中。目前獲得了7株VvACS5轉基因擬南芥純系植株。轉基因擬南芥植株表現(xiàn)出葉片大