大豆1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合酶基因啟動(dòng)子的克隆與分析.pdf

1、乙烯作為一種植物激素，對(duì)植物種子萌發(fā)、生長(zhǎng)發(fā)育、衰老、果實(shí)成熟、性別決定等有廣泛的影響，同時(shí)與逆境脅迫如機(jī)械傷害、冷害、漬水、病原菌入侵等方面有關(guān)，并參與植物細(xì)胞的程序性死亡。ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylate，1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸)合酶是乙烯合成途徑中的限速酶，它在植物組織內(nèi)活性的大小往往決定著乙烯產(chǎn)生的速率，因此ACC合酶基因的調(diào)控對(duì)于乙烯的體內(nèi)合成是至關(guān)重要的，而目前有關(guān)大豆ACC合酶基

2、因啟動(dòng)子的研究尚未見報(bào)道，本研究分離得到了大豆ACC合酶基因啟動(dòng)子，并對(duì)其進(jìn)行初步的功能分析。 根據(jù)已報(bào)道的大豆ACC合酶基因序列(GenBank Accession No:dq273840)設(shè)計(jì)三個(gè)基因特異的反向引物CTA798 sp1，CTA798 sp2，CTA798 sp3，分別與4個(gè)簡(jiǎn)并引物配對(duì)，通過熱不對(duì)稱PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)擴(kuò)增，獲得了該基因

3、上游約600bp的序列。利用5'-cDNA末端快速擴(kuò)增(5’Rapid Amplification of cDNA ENDs,5'-RACE)實(shí)驗(yàn)，確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TTS)位于起始密碼子上游164 bp處，由此獲得了大豆ACC合酶基因上游長(zhǎng)約328bp的啟動(dòng)子序列。用PLACE和PLANTCARE軟件分析此序列，發(fā)現(xiàn)該序列具有啟動(dòng)子的基本元件TATA-box和CAAT-box；此外發(fā)現(xiàn)三個(gè)脅迫誘導(dǎo)元件：光應(yīng)答元件Boxl，Box4和刺