熒光假單胞桿菌2P24中1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（ACC）脫氨酶基因（acdS）的克隆.pdf

1、許多植物促生細菌中含有1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)脫氨酶基因(acdS)。已有報道認為含有acaS的細菌，在植物種子表面或根部定殖時可將種子或根部分泌的ACC分解為α-丁酮酸和氨，從而降低植物體內(nèi)的ACC水平。ACC的減少導(dǎo)致乙烯的減少，因此解除了乙烯對植物根生長的抑制，最終表現(xiàn)為促進了植物根的伸長生長。 本研究利用已構(gòu)建的熒光假單胞桿菌Pseudomonas fluorescens 2P24基因組文庫，通過設(shè)計同源性引物

2、和PCR篩選法克隆了2P24的acdS基因和部分相鄰的調(diào)節(jié)基因。AcdS氨基酸序列與P. fluorescens 17的相似性為98％，與Pseudomonas syringae pv. phaseolicola 1448A的相似性為89％，與Ralstonia solanacearum GMI1000的相似性為86％。通過設(shè)計引物，內(nèi)缺失突變該基因，得到突變子PM108。又以質(zhì)粒pRK415G作為acdS的載體，轉(zhuǎn)入野生菌P. flu

3、orescens 2P24中，得到該突變體的互補菌株P(guān)M108T2。在以ACC(3mM)為唯一氮源的改造過的M9培養(yǎng)液中培養(yǎng)40小時后發(fā)現(xiàn)野生型2P24和PM108T2可以生長，PM108G生長受到顯著抑制，而添加了NH<,4>Cl(0.03M)的改造過的M9中，PM108生長與野生型無明顯差異。在添加了ACC(5mM)的改造過的M9培養(yǎng)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)試驗中，培養(yǎng)23小時后野生型2P24和互補菌株P(guān)M108T2檢測到較高的ACC脫氨酶酶活

4、，而幾乎測不到含有空載體的PM108的ACC脫氨酶活性。待測菌株的生長曲線在測定時間內(nèi)相互之間無顯著差異。以上結(jié)果說明acdS在生防菌株2P24中是功能性的ACC脫氨酶基因。在ACC脫氨酶酶活隨ACC誘導(dǎo)時間變化的試驗中，2P24誘導(dǎo)6小時的時候，酶活達到最高，隨后下降。利用含有空載體的2P24、acdS基因突變體PM108以及互補菌PM108T2處理油菜種子，在所用的試驗條件下，根長數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析，在0.05水平上并無顯著差異。說明a