疏水整體柱在線固相萃取食品中5種阿維菌素類藥物殘留的研究.pdf

1、目的：對(duì)于食品中阿維菌素類藥物殘留的監(jiān)測(cè)，在色譜分析之前，往往需要通過固相萃取前處理以去除雜質(zhì)、濃縮目標(biāo)物。為了克服傳統(tǒng)固相萃取離線操作自動(dòng)化程度低、吸附劑難以重復(fù)使用等缺點(diǎn)，本論文建立一種可重復(fù)使用的疏水整體柱在線固相萃取結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS），同時(shí)、快速分析動(dòng)植物源性食品中5種阿維菌素類藥物殘留的方法。
　　方法：1、通過原位聚合制備疏水聚（甲基丙烯酸丁酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯）（poly（BMA-co-ED

2、MA））（10 mm×2.1 mm，id）整體柱，考察反應(yīng)時(shí)間（2~24 h）和反應(yīng)溫度（55~65℃）對(duì)整體柱疏水性能的影響，并對(duì)其通透性、機(jī)械強(qiáng)度和表面形貌進(jìn)行表征。2、將最優(yōu)條件下制得的poly（BMA-co-EDMA）整體柱作為在線固相萃取吸附劑，用于動(dòng)物源性（牛肉、牛肝和牛奶）和植物源性（鮮梨和辣椒）食品中5種阿維菌素類藥物殘留的前處理。實(shí)驗(yàn)考察了在線固相萃取主要參數(shù)的影響，包括上樣流動(dòng)相種類（5 mmol/L和10 mmol

3、/L乙酸銨緩沖溶液、0.1％和0.5%甲酸溶液）、洗脫流動(dòng)相種類（甲醇、乙腈）和洗脫流速（0.3~0.8 mL/min）。3、經(jīng)poly（BMA-co-EDMA）整體柱富集凈化后的5種阿維菌素類藥物直接洗脫至C18分析柱進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，實(shí)驗(yàn)對(duì)分離流動(dòng)相的種類（乙腈-0.5%甲酸溶液、乙腈-0.1%氨水溶液）、乙腈初始比例（80%~10%）以及質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。4、在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定基質(zhì)效應(yīng)、特異性、檢出限、定量限、線性范

4、圍和回收率等指標(biāo)。此外，通過同一根poly（BMA-co-EDMA）整體柱不同使用次數(shù)、以及相同批次和不同批次合成的整體柱對(duì)阿維菌素固相萃取得到的色譜峰峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，評(píng)價(jià)該吸附劑的使用壽命和重現(xiàn)性。
　　結(jié)果：1、實(shí)驗(yàn)表明，在考察條件下，隨著反應(yīng)時(shí)間的增長(zhǎng)和反應(yīng)溫度的提高，poly（BMA-co-EDMA）整體柱疏水作用無(wú)顯著變化。選擇整體柱合成條件為55℃水浴反應(yīng)4 h，該柱柱床均勻、連續(xù)多孔，其柱壓與操作流速呈現(xiàn)良好

5、線性關(guān)系（r=0.999）。2、將poly（BMA-co-EDMA）整體柱用作在線固相萃取吸附劑，實(shí)驗(yàn)以10 mmol/L乙酸銨緩沖溶液為上樣流動(dòng)相，在流速為0.5 mL/min條件下以乙腈為洗脫流動(dòng)相將目標(biāo)物洗脫并轉(zhuǎn)移至C18分析柱。3、在LC-MS/MS分析時(shí)，為了獲得高靈敏度，選擇乙腈-0.1%氨水溶液為梯度洗脫流動(dòng)相并確定乙腈初始比例為10%。4、方法對(duì)食品中5種阿維菌素類藥物殘留的分析時(shí)間為15 min，在1~100μg/L范

6、圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.995），對(duì)5種阿維菌素類藥物檢出限為2μg/kg，定量限為5μg/kg。在5.0、10.0、50.0μg/kg三個(gè)添加水平的回收率為71.8%~101.3%，日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤8.94%。同一根整體柱第1次、第250次和第500次使用，阿維菌素色譜峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.4%；使用相同批次和不同批次合成的poly（BMA-co-EDMA）整體柱，得到阿維菌素色譜峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.3%和

7、9.3%。
　　結(jié)論：基于疏水整體柱在線固相萃取結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，建立了動(dòng)植物源性食品中5種阿維菌素類藥物殘留同時(shí)測(cè)定的方法，滿足食品中阿維菌素類藥物的常規(guī)分析測(cè)定要求。方法自動(dòng)化程度高，在線測(cè)定提高了方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度；分析速度快，離線方法僅固相萃取就需要耗時(shí)2h以上，而本方法對(duì)食品樣品的前處理和分析測(cè)定過程總共只需15 min；疏水整體柱制備簡(jiǎn)單，重復(fù)性良好，可達(dá)500次以上，并且對(duì)動(dòng)植物源性食品均具有良好的富集凈化