低溫脅迫和激素對外源基因表達(dá)及愈傷組織防御酶活性的影響.pdf

1、本文以轉(zhuǎn)基因白樺愈傷組織為材料,分別以不同濃度的BA+NAA、BA+TDZ激素組合、4℃低溫脅迫處理愈傷組織。測定其保護(hù)酶等生理指標(biāo),并用熒光定量PCR法檢測其MET、DRM、BGT基因的表達(dá)情況。所得結(jié)果如下:
　　 1、不同濃度BA+NAA繼代培養(yǎng)中,適當(dāng)濃度的BA(0.2 mg/L)能夠提高保護(hù)酶的活性。BA濃度的變化抑制了DRM基因的表達(dá),最低為CK的34.06％,促進(jìn)了MET基因的表達(dá),最高為CK的5.52倍。且BA濃

2、度的變化能促進(jìn)外源基因BGT(抗蟲基因)的表達(dá),最高為CK的18.18倍。NAA濃度的升高(0.2-2 mg/L)能夠提高保護(hù)酶的活性,但不能抑制MDA的積累。NAA濃度的變化促進(jìn)TP46MET基因的表達(dá),最高為CK的3.67倍,抑制TP74MET基因的表達(dá),僅為CK的76.26％。NAA濃度的升高對DRM基因的表達(dá)影響不大。NAA濃度為0 mg/L時促進(jìn)BGI基因的表達(dá),為CK的10.03倍。
　　 2、不同濃度BA+TDZ繼

3、代培養(yǎng)中,BA濃度的變化,無論是升高還是降低,都能夠提高保護(hù)酶的活性。適當(dāng)濃度的BA(1 mg/L)促進(jìn)了DRM、MEI韻表達(dá),分別為CK.的2.17倍和2.97倍。BA濃度為10 mg/L時抑制了BGT抗蟲基因的表達(dá),僅為CK的42.63％。一定濃度的TDZ(0.01-0.1 mg/L)能夠提高保護(hù)酶活性,抑制MDA的積累。不同濃度的TDZ處理促進(jìn)了MET和DRM基因的表達(dá),最高值分別達(dá)CK的2.97倍和3.77倍。適當(dāng)濃度的TDZ(

4、0.1 mg/L)能促進(jìn)BG7基因的表達(dá),為CK的8.19倍。TDZ濃度低時(0.005 mg/L)反而抑制BGT基因的表達(dá),僅為CK的78.39％。
　　 3、4℃低溫脅迫處理使愈傷組織的保護(hù)酶活性呈先升高后降低的趨勢,最高值基本出現(xiàn)在12 h。低溫脅迫處理能夠促進(jìn)轉(zhuǎn)基因無性系TP46(轉(zhuǎn)基因正常表達(dá))中MET基因的表達(dá),最高達(dá)CK的4.24倍,抑制DRM的表達(dá)量,最低僅為CK的11.23％。短時間的低溫脅迫(2 h)能促進(jìn)抗