雙水相萃取白蛋白和酶的初步研究.pdf

1、蛋白質(zhì)和酶在人類日常生活、疾病預(yù)防和治療以及工業(yè)生產(chǎn)中都發(fā)揮著重要的作用，其提取分離是獲取這類物質(zhì)的必要手段。目前，工業(yè)上粗分離蛋白質(zhì)的主要方法有鹽析法、等電點(diǎn)沉淀法和有機(jī)溶劑沉淀法。雖然這幾種方法都能在一定程度上達(dá)到分離的目的，但仍然存在諸多缺點(diǎn)，如操作步驟繁瑣，對操作條件要求苛刻，而且分離過程中容易發(fā)生蛋白質(zhì)變性，蛋白分離提取的收率和效率較低。針對這些問題，本文提出了采用低分子量親水有機(jī)溶劑/無機(jī)鹽的新型雙水相體系對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離提

2、取。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴考察了多種單羥基的短鏈醇/無機(jī)鹽雙水相體系對牛血清白蛋白的萃取能力。結(jié)果表明，多種體系對白蛋白都有較好的萃取效果。綜合考慮成本、工業(yè)可行性、萃取效果，選取了磷酸氫二鉀/乙醇和碳酸鈉/乙醇體系做進(jìn)一步的研究。在磷酸氫二鉀18％(w/w)/乙醇18％(w/w)、碳酸鈉13％(w/w)/乙醇18％(w/w)時(shí)，白蛋白收率達(dá)到最大分別為94.0％、93.6％，此時(shí)的白蛋白分配系數(shù)為11.52、11.

3、24，這與傳統(tǒng)的低分子量聚乙二醇/磷酸氫二鉀體系萃取效果相似。
　　 ⑵采用萃取能力較強(qiáng)、且受溫度和pH影響較小的磷酸氫二鉀/乙醇體系對發(fā)酵液和牛血液中的白蛋白進(jìn)行分離提取。在發(fā)酵液處理方面，首先考察了對0.2L發(fā)酵液的萃取能力，在磷酸氫二鉀20％(w/w)/乙醇18％(w/w)時(shí)白蛋白回收率和菌體去除率高達(dá)93.5％和99.8％；進(jìn)一步做了放大實(shí)驗(yàn)，考察了此體系對2L、23L、50L、73L的發(fā)酵液的處理能力，得到的白蛋白收率

4、依次為106.3％、113.2％、98.3％和96.7％；將處理后的上相調(diào)節(jié)pH4.5后依次過高鹽陽離子、疏水和陰離子柱層析進(jìn)行純化，純化后的白蛋白在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳上得到了單一條帶，經(jīng)HPLC分析結(jié)果顯示純度為99.71％。當(dāng)牛血液稀釋倍數(shù)為9、磷酸氫二鉀18％(w/w)和乙醇15％(w/w)時(shí)，84.41％的白蛋白被萃取到了上相，而IgG和雜蛋白則大部分被沉淀到了兩相界面處，達(dá)到了一個(gè)較為理想的分離提取效果。