基于脂筏色譜篩選SD抗腫瘤活性成分及其制劑研究.pdf

1、SD為獨行菜(LepidiumapetalumWild)的干燥成熟種子，具有消腫利尿、止咳平喘、強心等功效，為臨床常用中藥。
　　 本文采用前期研究中已建立的脂筏色譜對SD的水提液、乙醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、水飽和正丁醇萃取部位及萃余部分進行抗腫瘤活性篩選，發(fā)現(xiàn)水提液在U251脂筏色譜柱上有保留行為，而水飽和正丁醇萃取部位則在MCF-7脂筏色譜柱上有保留行為，表明該中藥中含有抗腫瘤活性成分。
　　 將SD適當粉碎，

2、用石油醚冷浸提取，回收石油醚得SD油;藥渣以水提醇沉的方法再次進行提取與除雜，上清液回收乙醇后，采用系統(tǒng)溶劑法萃取，依次得到乙酸乙酯萃取部位、水飽和正丁醇萃取部位及萃余部分;然后用硅膠柱層析法對乙酸乙酯、水飽和正丁醇兩個萃取部位中的化學(xué)成分進行分離，并以大孔吸附樹脂對萃余部分進行分離，共計得到了16個流分。以U251細胞株為受試對象，采用MTT法對SD油及所有流分進行抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明，乙酸乙酯的Fr4流分和水飽和正丁醇的Fr10

3、流分具有較強的抗腫瘤活性。
　　 此后，以SGC、HepG2、MCF-7及SCLC細胞株為受試對象，采用MTT法進一步研究了水飽和正丁醇Fr10流分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明，F(xiàn)r10流分對MCF-7和HepG2的抑制效果（IC50分別為0.77μg/mL和1.55μg/mL）優(yōu)于SGC和SCLC。此外，還考察了該流分對正常纖維細胞的毒性，結(jié)果顯示其對正常細胞的毒性很小。
　　 采用硅膠柱色譜和C8反相柱色譜對水飽和正丁醇活

4、性流分進行系統(tǒng)分離，得到化合物Ⅰ～Ⅴ，并通過NMR等波譜技術(shù)鑒定了其中的4個?；衔铫駷榻孀铀幔╯inapicacid），化合物Ⅱ為3-(羥基甲氧基)丙烯酸(3-(hydroxymethoxy)acrylicacid)，化合物Ⅲ為2-((2.羥基乙烯基)氧)乙酸(2-((2-hydroxyvinyl)oxy)aceticacid)，化合物Ⅳ為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（異槲皮苷，quercetin-3-O-β-D-glucop

5、yranoside），其中化合物Ⅱ和Ⅲ為首次從該植物中分離得到。
　　 采用了毒性分類法評價水飽和正丁醇Fr10流分經(jīng)口急性毒性作用，結(jié)果表明該流分對小鼠灌胃給藥的LDso約為4000～5000mg/kg;此外，還采用了改良的寇氏法評價了Fr10流分腹腔注射給藥的急性毒性作用，結(jié)果顯示該流分對小鼠腹腔注射給藥的LD50為505.36mg/kg，LD50的95％平均可信限為590.32mg/kg～432.61mg/kg。
　

6、　 采用逆向蒸發(fā)法制備水飽和正丁醇Fr10流分脂質(zhì)體，以凝膠柱色譜法分離脂質(zhì)體和游離藥物，建立了紫外分光光度法測定脂質(zhì)體中Fr10流分的含量及包封率。結(jié)果表明，水飽和正丁醇Fr10流分在14.88～89.28μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=0.0086C+0.0044，r=1;日內(nèi)精密度RSD小于2％，日間精密度RSD小于3％，回收率在93％-96％之間。在單因素考察的基礎(chǔ)上，選取了藥脂比、磷脂/膽固醇比、有機相/水相比三