轉(zhuǎn)Cry1Ab-Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因玉米食用安全性評價研究.pdf

1、目的：
　　本研究以“實質(zhì)等同性原則”、“個案分析原則”為基礎(chǔ)，參照《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價指南》進行，探討復(fù)合性狀轉(zhuǎn)基因植物食用安全性評價方法，并對我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因作物—轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米進行食用安全性評價，為建立系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因食品安全性評價體系進行探索。
　　從轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米新表達蛋白的外源性制備入手

2、，對微生物制備的重組蛋白與轉(zhuǎn)基因玉米體內(nèi)新表達蛋白進行等同性分析，在證明兩者實質(zhì)等同的前提下對外源性重組蛋白進行毒性、致敏性研究;對經(jīng)PCR確認(rèn)成分的轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米進行關(guān)鍵營養(yǎng)素成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子分析以及亞慢性毒性研究。評價轉(zhuǎn)CrylAb/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米的食用安全性。
　　方法：
　　1.Cry1Ab/Cry2Aj和G1

3、0evo(EPSPS)重組蛋白小鼠急性經(jīng)口毒性:《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》(GB15193.03-2003);
　　2.Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)重組蛋白體外模擬胃/腸道消化穩(wěn)定性試驗:《模擬胃腸液外源蛋白質(zhì)消化穩(wěn)定性試驗方法》農(nóng)業(yè)部869號公告;
　　3.Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)重組蛋白氨基酸序列分析:SORTALLER過敏原數(shù)據(jù)庫;
　　4.轉(zhuǎn)Cry

4、1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米定性PCR檢測:用針對轉(zhuǎn)基因抗蟲和耐草甘膦玉米的特異基因以及玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因zssⅡb的特異性引物進行PCR擴增，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳后，于凝膠成像系統(tǒng)上分析結(jié)果;
　　5.轉(zhuǎn)CrylAb/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米營養(yǎng)成分及抗?fàn)I養(yǎng)因子分析:GB/T5009-2010等;
　　6.轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G

5、10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米大鼠90天喂養(yǎng)試驗:《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測大鼠90天喂養(yǎng)試驗》(NY/T1102-2006)。
　　結(jié)果：
　　1.通過外源基因微生物高效表達系統(tǒng)，制備了外源基因表達的Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)蛋白，該兩蛋白從分子量、質(zhì)譜分析、免疫原性等方面與植物表達的目的蛋白具有實質(zhì)等同性;
　　2.Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS

6、)重組蛋白小鼠急性經(jīng)口毒性雌、雄均為LD50＞2000mg/kg·BW;
　　3.Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)重組蛋白在模擬胃/腸液中0-15s內(nèi)全部消化，表明該兩種蛋白在模擬胃/腸液中極易消化，不具消化穩(wěn)定性;
　　4.Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)重組蛋白通過SORTALLER過敏原數(shù)據(jù)庫進行比對，結(jié)果兩種重組蛋白均為非致敏原;
　　5.轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj

7、和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米進行定性PCR檢測，結(jié)果表明轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因玉米具有特異Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因，非轉(zhuǎn)基因玉米沒有該基因;
　　6.轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米和親本對照玉米的主要營養(yǎng)素水平和抗?fàn)I養(yǎng)因子—植酸水平接近，主要營養(yǎng)素含量水平均在文獻報道范圍內(nèi);
　　7.轉(zhuǎn)C

8、ry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米與親本對照玉米飼喂大鼠90天，結(jié)果顯示在動物體重、進食量、食物利用率、血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)等方面雖然部分指標(biāo)存在差異，但差異范圍均在實驗室歷史對照范圍內(nèi)，沒有發(fā)現(xiàn)性別一致性，并且未出現(xiàn)劑量反應(yīng)關(guān)系，未見生物學(xué)意義。大體解剖和組織病理學(xué)檢查均未見飼喂轉(zhuǎn)基因玉米組的動物臟器出現(xiàn)明顯異常改變。
　　結(jié)論：
　　通過研究結(jié)果表明，Cry1Ab/Cry2Aj和G

9、10evo(EPSPS)重組蛋白未見明顯的急性經(jīng)口毒性，致敏性方面通過SORTALLER過敏原數(shù)據(jù)庫進行比對，兩種重組蛋白均為非致敏原，而且體外模擬胃/腸液消化穩(wěn)定性試驗提示兩種蛋白均不具消化穩(wěn)定性，可認(rèn)為Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)重組蛋白具有潛在致敏性的可能性較低;在全食品安全性評價中，轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因抗蟲耐草甘膦玉米的關(guān)鍵營養(yǎng)成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子與親本玉米含量基本一