轉(zhuǎn)高賴氨酸蛋白基因玉米食用安全性評(píng)價(jià)及致敏評(píng)價(jià)模式研究.pdf

1、隨著我國(guó)轉(zhuǎn)基因食品的開(kāi)發(fā)和國(guó)外轉(zhuǎn)基因食品的進(jìn)入，消費(fèi)者使用轉(zhuǎn)基因食品的機(jī)會(huì)在不斷的增加。由于轉(zhuǎn)基因食品可能對(duì)環(huán)境和健康造成的影響的不確定性，其安全性一直是備受世人關(guān)注的焦點(diǎn)。 本論文對(duì)轉(zhuǎn)賴氨酸蛋白玉米的食用安全性及致敏安全評(píng)價(jià)模型的建立進(jìn)行了研究。營(yíng)養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)是安全評(píng)價(jià)的重要組成部分，本文通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)高賴氨酸蛋白玉米的營(yíng)養(yǎng)成分、氨基酸組成、蛋白組分等分析，全面分析了其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其非期望效應(yīng)，為轉(zhuǎn)基因食品尤其對(duì)于第二代轉(zhuǎn)基因食品的營(yíng)養(yǎng)評(píng)

2、價(jià)提供了依據(jù)。 為了更好地分析外源蛋白的食用安全性及致敏性，利用pET-30a表達(dá)載體，在E.coliBL21中高效表達(dá)外源高賴氨酸蛋白，利用Ni-NTA親和層析柱純化蛋白。通過(guò)試驗(yàn)，找到了表達(dá)蛋白的最佳表達(dá)時(shí)間為3～4h，誘導(dǎo)劑IFTG濃度為0.6mmol/L及蛋白純化最佳條件，表達(dá)蛋白的量與純度滿足今后的安全研究需要。 對(duì)大腸桿菌表達(dá)的純化高賴氨酸蛋白開(kāi)展了一系列的食用安全性研究，包括：利用生物信息學(xué)工具對(duì)高賴氨酸蛋

3、白進(jìn)行結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)預(yù)測(cè)，利用ExPASy網(wǎng)站提供的多個(gè)軟件對(duì)高賴氨酸蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)預(yù)測(cè)，并利用BLAST和FASTA程序多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜索比對(duì)，確定高賴氨酸蛋白與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的致敏蛋白不具有同源性。 進(jìn)行了外源蛋白的模擬胃腸液消化穩(wěn)定性研究，包括胃蛋白酶穩(wěn)定性試驗(yàn)和胰蛋白酶穩(wěn)定性試驗(yàn)，并經(jīng)western-blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，高賴氨酸蛋白在體外模擬胃腸液中不具有消化穩(wěn)定性能。外源蛋白的食用安全性和致敏動(dòng)物模型的建立。本研究

4、將BALB/c小鼠和BN大鼠模型相結(jié)合，將口服和腹腔注射相結(jié)合，利用純化外源蛋白對(duì)BALB/c小鼠腹腔注射，對(duì)BN大鼠口服處理，綜合判斷其毒性、免疫特性和致敏性。結(jié)果表明，高賴氨酸蛋白對(duì)BALB/c小鼠和BN大鼠均不具有致敏性。 通過(guò)亞慢性毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)了轉(zhuǎn)高賴氨酸玉米飼喂大鼠的安全性。分別飼喂含30％添加量的玉米和最大添加量的玉米，試驗(yàn)期13wks。建立了以生長(zhǎng)性能、血液學(xué)、血清化學(xué)、尿液指標(biāo)、解剖學(xué)、組織病理等綜合指標(biāo)判斷轉(zhuǎn)基

5、因食品安全性的亞慢性全食物飼喂動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?建立了評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因植物外源基因水平轉(zhuǎn)移的大鼠評(píng)價(jià)模型和大鼠的咬肌組織、腸組織、糞便及腸道微生物的基因組的提取方法及PCR檢測(cè)體系。大鼠的亞慢性毒性試驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)基因玉米以比正常水平高2倍添加在日糧中，無(wú)論對(duì)動(dòng)物健康還是對(duì)動(dòng)物產(chǎn)品都具有生物學(xué)安全性，外源基因沒(méi)有發(fā)生水平轉(zhuǎn)移。 本文通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)、外源蛋白性質(zhì)結(jié)構(gòu)及與己知致敏源的同源性分析、穩(wěn)定性檢測(cè)、食用安全性、致敏性