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1、大腸桿菌是一種重要的病原菌,可導(dǎo)致人腹瀉,引起敗血癥,嚴(yán)重時(shí)可造成死亡。腸出血性大腸桿菌O157感染曾在世界范圍內(nèi)多次爆發(fā),并造成嚴(yán)重危害,引起了各國(guó)的普遍關(guān)注。快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)大腸桿菌是預(yù)防和控制疫病流行的關(guān)鍵,目前大腸桿菌的檢測(cè)方法主要有傳統(tǒng)的菌落檢測(cè)法、PCR法和基因檢測(cè)法,這些方法存在著耗時(shí)長(zhǎng)、儀器要求高及難以迅速推廣等缺點(diǎn),因此,尋找快速而簡(jiǎn)便易行的大腸桿菌檢測(cè)新方法對(duì)于食品衛(wèi)生及疫病的防控具有重要意義。近年來,納米技術(shù)在生物
2、檢測(cè)方面的研究發(fā)展迅速,納米顆粒粒徑小,有許多獨(dú)特的理化性質(zhì),例如:比表面積大、反應(yīng)活性高等,特別是具有半導(dǎo)體特性的納米子—量子點(diǎn)(QDs,quantem dots)以其獨(dú)特的光譜特性(如其熒光強(qiáng)度高且穩(wěn)定,顏色豐富等)為分析化學(xué)開辟了新的研究途徑。本研究著眼于大腸桿菌對(duì)不同寡糖序列的識(shí)別能力,旨在利用量子點(diǎn)獨(dú)特的光學(xué)特性建立一種快速、簡(jiǎn)便的大腸桿菌檢測(cè)新方法。具體研究思路為:將大腸桿菌識(shí)別的寡糖耦合到量子點(diǎn)表面,制備對(duì)不同大腸桿菌具有
3、特異性結(jié)合能力的功能糖量子點(diǎn)顆粒,通過該納米顆粒對(duì)大腸桿菌的特異性粘附,并檢測(cè)糖量子點(diǎn)的熒光特性、光譜吸收特征以及對(duì)大腸桿菌的促凝效果,進(jìn)而確定大腸桿菌的種類乃至亞型。
本研究選擇三種糖為試驗(yàn)對(duì)象:Galactose(半乳糖)作為大腸桿菌O157的受體寡糖;Mannose(甘露糖)作為大腸桿菌ORN178的受體糖鏈;Lactose(乳糖)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照,并設(shè)計(jì)和制備了相應(yīng)的三種糖量子點(diǎn):Galactose-QDs、Manno
4、se-QDs和Lactose-QDs。在生物活性檢測(cè)方面,首先通過與植物凝集素共孵育并測(cè)定紫外吸收光譜,確定了三種糖量子點(diǎn)可與不同的植物凝集素發(fā)生特異性結(jié)合,而后通過熒光顯微鏡觀察對(duì)糖-量子點(diǎn)與大腸桿菌ORN178的相互作用進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。結(jié)果表明:只有Mannose-QDs可與大腸桿菌ORN178產(chǎn)生結(jié)合,并使細(xì)菌產(chǎn)生了集簇現(xiàn)象。目前進(jìn)一步的深入實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。通過上述研究,本課題已建立了三種糖量子點(diǎn)的合成方法,并初步確認(rèn)了糖量子點(diǎn)與
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