牡蠣活性肽及其復(fù)合物降血糖作用的研究.pdf

1、目的：
　　初步研究牡蠣肽及其復(fù)合物的降血糖活性與其作用機(jī)理。
　　方法：
　　1）采用復(fù)合酶酶解牡蠣，并進(jìn)一步利用葡聚糖凝膠層析法對(duì)牡蠣肽進(jìn)行分離純化。以牡蠣肽對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標(biāo)，篩選出對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率高的牡蠣肽以及其最佳酶解時(shí)間。
　　2）利用葡聚糖凝膠層析法測(cè)定牡蠣肽的相對(duì)分子質(zhì)量，并體外檢測(cè)其抗氧化活性；建立糖尿病小鼠模型，考察牡蠣肽對(duì)糖尿病小鼠的降血糖作用并測(cè)定其對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)及抗氧

2、化應(yīng)激系統(tǒng)的作用。
　　3）以對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標(biāo)，篩選牡蠣肽與低聚殼聚糖最佳復(fù)合配比，考察牡蠣肽復(fù)合物對(duì)糖尿病小鼠的降血糖活性，同時(shí)測(cè)定機(jī)體免疫系統(tǒng)及抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)各項(xiàng)生化指標(biāo)，HE染色觀察胰臟、肝臟和腎臟病理切片，分析探討其降血糖作用的機(jī)理。
　　結(jié)果:
　　1）牡蠣肽最佳復(fù)合酶組合為胰蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶（質(zhì)量比1:1），牡蠣酶解后經(jīng)葡聚糖凝膠G-25層析后的峰Ⅲ組分對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率最高，達(dá)到56

3、.96％，其IC50值為20.62mg/mL。復(fù)合酶對(duì)牡蠣的最佳酶解時(shí)間為2h。
　　2）牡蠣肽峰Ⅲ組分的相對(duì)分子質(zhì)量為1813D，其對(duì)?OH的清除率高達(dá)61.08%，對(duì)DPPH?的清除能力為72.60%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，牡蠣肽通過腹腔給藥能顯著降低糖尿病小鼠血糖（p＜0.05），其中牡蠣肽高劑量組的血糖最低為16.37±3.52mmol/L；牡蠣肽體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，與模型組小鼠相比，牡蠣肽組胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)明顯升高，具有顯著性差異（

4、p<0.05），牡蠣肽對(duì)糖尿病小鼠免疫系統(tǒng)具有很好的保護(hù)作用，防止免疫器官萎縮；牡蠣肽高劑量組小鼠血清中SOD活性明顯升高（p<0.05），MDA水平顯著降低（p<0.01），牡蠣肽對(duì)糖尿病小鼠機(jī)體抗氧化系統(tǒng)具有一定的保護(hù)作用。
　　3）牡蠣肽與低聚殼聚糖最佳復(fù)合配比為：牡蠣肽∶低聚殼聚糖=1:2（質(zhì)量比），在此條件（濃度為50mg/mL）下復(fù)合物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率高達(dá)57.84%。此最優(yōu)配比復(fù)合物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率均高于

5、同濃度下牡蠣肽和低聚殼聚糖。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，與模型組相比，復(fù)合組能顯著的降低糖尿病小鼠血糖（p<0.05），且呈明顯的劑量依賴關(guān)系；同時(shí)能顯著升高糖尿病小鼠血清 SOD，顯著降低 MDA(p<0.05)；顯著降低糖尿病小鼠血清TC和LDL水平(p<0.05)，升高HDL水平含量；HE染色顯示小鼠的胰臟、肝臟和腎臟得到一定程度的修復(fù)。結(jié)果說明，復(fù)合組對(duì)糖尿病小鼠機(jī)體抗氧化系統(tǒng)具有很好的保護(hù)作用，并具有良好的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用，保護(hù)小鼠內(nèi)臟器