麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制備及表征.pdf

1、東華大學(xué)碩士學(xué)位論文麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制備及表征姓名：李力炯申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張興群201201東華大學(xué)碩士學(xué)位論文麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制各及表征1、從中國(guó)湖南腐爛苧麻上篩選得到的召口cfZ脅s“6療凰A5是一種能產(chǎn)生具有脫膠活性的堿性果膠酶的微生物。其發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨鹽析分級(jí)沉淀、透析、離子交換層析、交聯(lián)葡聚糖凝膠層析純化，得到分子量約為45kDa的堿性果膠酶。比酶活為52844

2、3U／『mg，整個(gè)純化過程酶活回收率為424％，純化倍數(shù)為605倍。酶最適反應(yīng)溫度為50℃，最適pH為96，較能夠耐受高溫和堿性環(huán)境。Ca2對(duì)其有一定的激活作用。C02，Ba2和EDTA對(duì)其有強(qiáng)的抑制作用。2、根據(jù)GenBank上召以cf2If淞s曲ff凰編碼堿性果膠酶(pectatelyase)的基因0PD序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，以曰口cf‰蹦施拯A5基因組DNA為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到1260bp的研叭片段。序列測(cè)定表明，B口

3、cf‰J糾6巧加A5的pgJ『基因序列與Ge出ank：X748801序列相比存在9處堿基差異，同源性為993％，氨基酸序列同源性為995％。曰acf刀淞J“6ff凰A5的pgJ『氨基酸序列與文獻(xiàn)中所報(bào)道的p已，活性位點(diǎn)(鈣離子結(jié)合位點(diǎn))以及鄰近鈣離子的保守氨基酸均為一致。將PCR擴(kuò)增獲得的pe，片段通過T載體連接，構(gòu)建克隆質(zhì)粒pMD節(jié)講，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH50【，獲得重組轉(zhuǎn)化子。雙酶切克隆質(zhì)粒pMD節(jié)P『，得到具有勛Ⅱ和舶紅酶切位點(diǎn)的粘性