蛋白磷酸酶-1cγ在魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育中的功能研究.pdf

1、蛋白質(zhì)的可逆磷酸化作用對(duì)于許多生物的生長(zhǎng)發(fā)育起著至關(guān)重要的調(diào)控作用，其中蛋白激酶和蛋白磷酸酶分別起著磷酸化和去磷酸化作用，蛋白磷酸酶-1(PP-1)是一種廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的蛋白磷酸酶，它能夠?qū)⒔z/蘇氨酸蛋白底物去磷酸化。在本論文中，我們將重點(diǎn)研究和闡述PP-1的催化亞基C的異構(gòu)體γ(Gama)基因(PP-1cγ)在動(dòng)物胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的功能與作用。首先，我們運(yùn)用RACE克隆技術(shù)在金魚(yú)中克隆出γ基因的cDNA全長(zhǎng);然后，運(yùn)用RT-

2、PCR技術(shù)檢測(cè)γ基因在金魚(yú)不同胚胎發(fā)育時(shí)期和不同組織中mRNA水平的表達(dá);最后，在金魚(yú)受精卵中注射PP-1cγ的Morpholino Oligomers(MO)或過(guò)表達(dá)PP-1cγ的質(zhì)粒載體，以此來(lái)分析研究PP-1cγ在金魚(yú)的胚胎發(fā)育中所扮演的功能角色。
　　具體研究結(jié)果如下:
　　(1)金魚(yú)中PP-1cγ基因的的cDNA全長(zhǎng)為1078bp，其中編碼區(qū)972bp，編碼一種含323個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。PP-1cγ蛋白的氨基酸序列

3、進(jìn)行不同物種同源性比對(duì)結(jié)果表明:該蛋白序列與斑馬魚(yú)的同源相似度為96.9％，與小鼠的為96.5％，與人的為96.5％。該結(jié)果表明了PP-1cγ的氨基酸序列在不同物種間具有較高的同源性，暗示了該基因在功能和進(jìn)化上具有較高的保守性，同時(shí)說(shuō)明PP1-cγ基因在功能上的至關(guān)重要性。
　　(2)半定量PCR結(jié)果顯示，在金魚(yú)的9種組織和12個(gè)不同胚胎發(fā)育時(shí)期中的表達(dá)量各不相同。其中，在12個(gè)不同胚胎發(fā)育時(shí)期中，PP-1cγ在眼色素期表達(dá)最強(qiáng)，

4、囊胚期和出膜期次之，視原基期、心跳期、腦泡期表達(dá)較高，多細(xì)胞期、神經(jīng)胚期、原腸期、肌效期以及體色素期表達(dá)較低，兩細(xì)胞期表達(dá)最低。在9種不同組織中，PP-1cγ在卵巢中表達(dá)量最高，心臟和鰓次之，在精巢、肌肉、鰭、腦四種組織中的表達(dá)水平相對(duì)較高，在腎、肝組織中的mRNA表達(dá)表達(dá)量較少。
　　(3)顯微注射結(jié)果表明，注射了PP1-cγ的MO和過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的金魚(yú)胚胎均產(chǎn)生了嚴(yán)重畸形或死亡，如胚胎的脊柱彎曲、眼睛發(fā)育異常以及大腦發(fā)育畸形等。這