一株產(chǎn)恩拉霉素的暗黑微綠鏈霉菌及其合成基因簇的研究.pdf

1、恩拉霉素是鏈霉菌Streptomyces fungicidious NO.B5477產(chǎn)生的一種含17個(gè)氨基酸的脂肽類(lèi)抗生素，根據(jù)其末端脂肪酸種類(lèi)的不同，分為恩拉霉素A和恩拉霉素B兩種結(jié)構(gòu)式。恩拉霉素對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有較好的抗菌活性，具有優(yōu)良的促生長(zhǎng)及改善飼料利用率的作用，常作為禽、豬、魚(yú)的抗生素促生長(zhǎng)劑。
　　 前期本室應(yīng)用鹵代酶基因?yàn)榉肿犹结?，從分離自紅樹(shù)林土壤環(huán)境的167株放線菌中篩選獲得一株含有與恩拉霉素合成基因中鹵代酶基因

2、高度同源基因的菌株暗黑微綠鏈霉菌Z40。本文構(gòu)建了Z40基因組DNA fosmid文庫(kù)，從該菌株基因文庫(kù)中定位了4個(gè)相互重疊的fosmid，所克隆的片段覆蓋完整的恩拉霉素生物合成基因簇。對(duì)該菌株發(fā)酵產(chǎn)物的HPLC分析及相關(guān)生物合成基因的缺失突變分析，確證了菌株Z40是一株新的恩拉霉素產(chǎn)生菌。另外，通過(guò)對(duì)恩拉霉素生物生物合成基因簇中可能的調(diào)節(jié)基因進(jìn)行了初步研究。
　　 核糖體工程是利用微生物的各類(lèi)抗性突變?yōu)楹Y選標(biāo)記，高效獲得次生代

3、謝產(chǎn)物合成能力提高突變株的推理育種新方法。本文對(duì)Z40進(jìn)行了鏈霉素抗性突變篩選，得到了一批活性明顯增強(qiáng)的突變株，其中菌株5s102和10s13發(fā)酵合成恩拉霉素的量比原始菌株Z40提高130％。對(duì)5s102和10s13突變株的rpsL基因進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)堿基突變位點(diǎn)(T176C)，對(duì)應(yīng)S12蛋白上一個(gè)氨基酸變化(K88R)，推測(cè)該點(diǎn)突變與突變株的產(chǎn)量提高相關(guān)。
　　 對(duì)Z40搖瓶發(fā)酵的培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化研究。從M