冷藏養(yǎng)殖大黃魚(yú)特定腐敗菌及其群體感應(yīng)信號(hào)分子DKPs鑒定與功能的研究.pdf

1、微生物是絕大多數(shù)水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的主要因素。但是，只有小部分產(chǎn)生不良?xì)馕逗陀卸居泻ξ镔|(zhì)的微生物能夠引起水產(chǎn)品腐敗，被稱為特定腐敗菌。在貯藏過(guò)程中，特定腐敗菌會(huì)隨著貯藏條件的不同而表現(xiàn)出多樣性。低溫貯藏中水產(chǎn)品的特定腐敗菌是希瓦氏菌屬（Shewanella spp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）。近幾年，希瓦氏菌屬因其在魚(yú)及魚(yú)制品中表現(xiàn)出的腐敗能力而被廣泛關(guān)注，它是一類革蘭氏陰性菌，能夠產(chǎn)生H2S，具有運(yùn)動(dòng)性。
　

2、　群體感應(yīng)信號(hào)分子具有密度依賴性，在腐敗菌中它能夠調(diào)控特定的基因表達(dá)致使食品腐敗。因此，本文的研究目的是鑒定養(yǎng)殖大黃魚(yú)在4℃低溫貯藏中的特定腐敗菌，并用GC-MS方法檢測(cè)該特定腐敗菌的群體感應(yīng)信號(hào)分子。該研究為將來(lái)創(chuàng)造新的水產(chǎn)品保鮮劑提供了新的思路與途徑。
　　本論文的研究?jī)?nèi)容包括以下3個(gè)部分:
　　1.從4℃空氣包裝養(yǎng)殖大黃魚(yú)中共分離得到102個(gè)菌株，74株(72.5％)為產(chǎn)H2S的菌株。通過(guò)傳統(tǒng)的生化分析和16S rDN

3、A的分子標(biāo)記鑒定，74株中有60株菌(81.1％)是希瓦氏菌屬，其中Shewanella baltica48株(64.9％)，剩下的14株菌(18.9％)為氣單胞菌屬（Aeromonas）和腸桿菌屬（Enterobacteriaceae）。因此，低溫貯藏養(yǎng)殖大黃魚(yú)的特定腐敗菌是S.baltica。
　　2.48株不同的S.baltica分別接種于無(wú)菌魚(yú)汁中，通過(guò)測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮和感官分析（氣味）來(lái)評(píng)估其腐敗能力。所有的結(jié)果表明，S

4、.baltica025的腐敗能力大于其他所有的菌株，S.baltica003的腐敗能力小于其他所有的菌株，由此可見(jiàn)，不同的S.baltica菌株的腐敗能力不同。為了從基因上找出兩菌株的差異，更好地理解其在水產(chǎn)品腐敗上的原理依據(jù)，進(jìn)一步的研究是測(cè)定S. baltica003和S.baltica025兩菌株的全基因，并通過(guò)16S rDNA分析發(fā)現(xiàn)S.baltica003為S.baltica OS223，S.baltica025為S.balt

5、ica OS185。經(jīng)過(guò)兩個(gè)菌株全基因的比較發(fā)現(xiàn)氧化三甲胺還原酶，胱氨酸合成酶和生物胺類合成酶存在基因上的差異性。
　　3.通過(guò)氣質(zhì)聯(lián)用從具有最強(qiáng)腐敗能力的S.baltica025的培養(yǎng)液中分離鑒定得到四種具有群體感應(yīng)信號(hào)分子作用的二酮哌嗪類化合物。在S.baltica025培養(yǎng)液中添加化學(xué)合成的四種 DKPs(cyclo-(L-Pro-L-Gly)，cyclo-(L-Pro-L-Leu)，cyclo-(L-Leu-L-Leu)和

6、cyclo-(L-Pro-L-Phe))，以此獲得了添加不同誘導(dǎo)物的細(xì)菌S.baltica025代謝產(chǎn)物粗提液，再將此類粗提取物接種于無(wú)菌養(yǎng)殖大黃魚(yú)魚(yú)汁中，定期對(duì)其進(jìn)行揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N)測(cè)定。結(jié)果表明魚(yú)汁經(jīng)過(guò)5天貯藏后實(shí)驗(yàn)組相較于空白組腐敗明顯，經(jīng)cyclo-(L-Pro-L-Phe)處理后的魚(yú)汁腐敗最明顯，而經(jīng)cyclo-(L-Pro-L-Leu)處理后的魚(yú)汁腐敗最弱，說(shuō)明DKPs對(duì)S.baltica的腐敗活性具有正調(diào)控作用。