高產(chǎn)共軛亞油酸的菌種誘變選育及酶學(xué)特性研究.pdf

1、共軛亞油酸(CLA)，由于其具有抑制腫瘤、降脂、降膽固醇等促進(jìn)健康的潛在生理功能，受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。生產(chǎn)富含CLA的發(fā)酵制品，或者制得CLA作為食品添加劑加入食品中，成為食品工業(yè)發(fā)展的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以菌株篩選、人工誘變處理得到高產(chǎn)菌株，及亞油酸異構(gòu)酶的分離純化為主要線索，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　從市購(gòu)泡菜中篩得能轉(zhuǎn)化生成CLA的菌株，其中以菌株Ips929轉(zhuǎn)化量最大。經(jīng)紫外波長(zhǎng)掃描和Ag+液相色譜分析，發(fā)酵產(chǎn)生CLA的量為3

2、0.913μg/mL，有兩種主要異構(gòu)體，9c，11t-CLA和10t，12c-CLA。經(jīng)16s rDNA測(cè)定為乳酸桿菌，命名為actobacillus sp.LL-ZSDS001。對(duì)該菌進(jìn)行了生物學(xué)特性研究，發(fā)現(xiàn)其最適生長(zhǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)27h，5％菌株接種量時(shí)，CLA總產(chǎn)量最大。當(dāng)?shù)孜餄舛葹?.35mg/mL時(shí)，CLA產(chǎn)量和亞油酸轉(zhuǎn)化率最大。
　　以篩得的菌株Lactobacillus sp.LL-ZSDS001為原始菌株，進(jìn)

3、行銫137-γ射線輻照和N離子束誘變共同處理。其中，銫137-γ射線輻照誘變，當(dāng)輻照劑量為70Gy時(shí)，致死率在88.63％-92.80％之間。篩得1菌株，經(jīng)5次傳代培養(yǎng)后，保持較穩(wěn)定且較強(qiáng)的產(chǎn)CLA的能力，為52.789μg/mL。對(duì)上述菌株進(jìn)行N離子束誘變處理，處理?xiàng)l件為真空度1×10-3Pa，能量20keV，注入劑量20～140×2.6×1013N+/cm2。得菌體
　　存活率曲線為“馬鞍型曲線”，“鞍脊”出現(xiàn)在注入劑量為80

4、、100、120×2.6×1013N+/cm2處。當(dāng)注入劑量為100、120×2.6×1013N+/cm2時(shí)，菌株的正突變率及突變幅度都相對(duì)較高。共篩得5株突變幅度高于50％，并有穩(wěn)定性遺傳的菌株，其中以A1轉(zhuǎn)化生成CLA能力最強(qiáng)，達(dá)到118.921μg/mL，比原始菌株的54.234μg/mL提高了119.27％。
　　采用硫酸銨分級(jí)沉淀、透析濃縮、葡聚糖凝膠G-100層析處理，對(duì)Lactobacillus sp.LL-ZSDS