豬血多肽的發(fā)酵法制備及其ACE抑制活性研究.pdf

1、我國豬血資源非常豐富，每年由屠宰生豬而產(chǎn)生的副產(chǎn)物豬血總量約15億公斤，但是國內(nèi)對(duì)豬血深加工或綜合利用的研究進(jìn)展緩慢，資源利用率低，既浪費(fèi)了寶貴的生物資源又造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。目前，利用不同蛋白資源開發(fā)功能多肽已成為研究熱點(diǎn)，本文對(duì)豬血粉蛋白制備豬血活性肽進(jìn)行了研究，并對(duì)其血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制作用進(jìn)行了探討。 對(duì)三株不同的枯草芽孢桿菌進(jìn)行了透明圈實(shí)驗(yàn)和產(chǎn)蛋白酶活力比較，選用DC值較大和產(chǎn)酶能力較強(qiáng)的B3菌株以豬血粉為原

2、料進(jìn)行發(fā)酵。結(jié)果發(fā)酵后豬血粉的蛋白質(zhì)含量下降了24.05％，氨基態(tài)氮含量分別增加了4.44倍，可溶蛋白含量上升了53.77％，說明枯草芽孢桿菌B3是發(fā)酵豬血粉的優(yōu)良菌株。 利用B3菌株進(jìn)行發(fā)酵豬血粉條件的單因素和正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，考察溫度、搖瓶轉(zhuǎn)速、起始pH值、接種量、時(shí)間對(duì)發(fā)酵液水解度的影響。結(jié)果確定發(fā)酵血粉制備豬血活性肽的最佳水解條件為：溫度30℃、轉(zhuǎn)速160rpm、pH7.5、接種量6％、發(fā)酵時(shí)間50h，得到最大水解度為32.

3、3％。 采用微濾膜和不同截留分子量的透析袋對(duì)B3菌株豬血粉發(fā)酵液進(jìn)行分離，冷凍干燥制備豬血活性肽粉。Tricine-SDS-PAGE電泳圖譜表明，未經(jīng)處理的發(fā)酵液和經(jīng)過0.22μm微孔濾膜處理的肽粉分子量分布廣泛，經(jīng)透析袋分離的組分級(jí)效果明顯，三者的分子量分布呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，可以分離得到較小分子量的多肽，且分子量明顯小于珠蛋白的分子量14.4kDa。 氨基酸分析表明，豬血多肽和豬血粉相比，組成氨基酸種類發(fā)生了變化，豬血粉、

4、大于10kDa、1kDa～10kDa、小于1kDa豬血多肽的氨基酸組成分別為13種氨基酸和4種未知寡肽、13種氨基酸和4種未知寡肽、12種氨基酸和6種未知寡肽、8種氨基酸和7種未知寡肽，隨著水解度增大、分子量減小呈現(xiàn)氨基酸構(gòu)成種類減少和寡肽數(shù)增加。豬血多肽含有甲硫氨酸，而豬血粉中未檢測(cè)出該種氨基酸，豬血多肽中均未檢出苯丙氨酸，在分子量介于1kDa～10kDa樣品多肽中未檢出精氨酸、分子量小于1kDa樣品多肽中未檢出天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨