食源“超級細菌”快速篩檢技術的構(gòu)建.pdf

1、目前，隨著進出口貿(mào)易技術壁壘花樣的不斷翻新，發(fā)達國家很有可能將進出口動物源性食品及飼料中的耐藥致病菌設置為一種新的貿(mào)易技術壁壘，無論出于何種目的，耐藥致病菌將在食品安全問題和進出口貿(mào)易上掀起一次大的波瀾，所以，很有必要進行前瞻性的檢測技術研究和分子流行病學調(diào)查，從而為我國政府應對國內(nèi)外食品安全的突發(fā)事件提供技術支持。
　　因在檢驗檢疫系統(tǒng)日常的食品、農(nóng)產(chǎn)品微生物檢測中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是常規(guī)五項檢測中的必檢項目，所以本論文

2、選擇大腸桿菌和金黃色葡萄球菌這兩種致病菌做為研究對象，試圖建立一種快速篩檢技術，來判斷它們是否存在超級耐藥基因。
　　本論文的主要研究內(nèi)容是利用大腸桿菌NDM-1基因和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因的序列特點，建立快速生化初篩技術和核酸層析膠體金快速檢測技術，并完成PCR-核酸層析膠體金快速檢測試劑條的研發(fā)，以滿足當前口岸檢疫新形勢的需要。
　　1.對大腸桿菌NDM-1基因和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因的菌株（

3、為生物安全起見，實際為合成的帶有超級耐藥基因的質(zhì)粒）進行分析，即兩種基因的合成與重組質(zhì)粒的構(gòu)建。然后，針對這兩種耐藥基因分別建立經(jīng)典的PCR檢測技術體系，利用經(jīng)典PCR技術對設計、合成的引物進行驗證，確定引物的特異性和靈敏度。
　　2.對大腸桿菌NDM-1基因、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因進行基因排列，按照結(jié)構(gòu)特點進行全面的信息收集，尋找、篩查保守區(qū)間。對其中目的片段序列進行比對分析，從中找出了滿足PCR-核酸層析膠體金的

4、特異性片段、特異性突變位點，建立PCR-核酸薄膜層析技術體系，并進行特異性和靈敏度的驗證。利用這一技術來檢測大腸桿菌的NDM-1基因和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的mecA基因，實現(xiàn)了提高超級耐藥基因NDM-1和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因檢測速度的目的，特異性良好，靈敏度分別為5.6×102cfu/ml和8.3×102cfu/ml。
　　3.利用建立的方法對山東省內(nèi)采集的樣品進行分析評估，對設計的試劑條進行評定、改進。對使用

5、過抗生素類的以禽畜肉為主的食品中是否存在“超級細菌”的危害進行了一次大規(guī)模的普查，進而對超級細菌是否會波及食品安全問題進行了一次比較科學的論證。
　　通過本論文的研究，分別構(gòu)建了針對NDM-1基因和mecA基因的經(jīng)典PCR檢測技術體系及PCR-核酸層析膠體金快速檢測方法。其中PCR-核酸層析膠體金快速檢測方法特異性和靈敏度良好、省時省力，同時還能避免凝膠電泳對操作人員帶來的健康問題。通過該方法對山東省內(nèi)禽畜肉為主的食品中是否存在“