L-賴氨酸類氨肽酶N抑制劑的設(shè)計、合成與初步活性研究.pdf

1、氨肽酶N(APN，CD13)是一類含鋅離子的膜結(jié)合型外肽酶，在許多組織包括腎臟、小腸、肝臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達。該酶參與了血管緊張素Ⅲ在腦部及外周器官的代謝，腦啡肽的降解和內(nèi)啡肽的失活。此外APN還是冠狀病毒229E和TEGV的受體。更為重要的是，腫瘤細胞表面有大量的APN表達，而Saiko及其同事證實APN(CD13)參與了腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，APN還參與了免疫調(diào)節(jié)，降解多種免疫活性物質(zhì)，削弱巨噬細胞和NK細胞對腫瘤細胞的

2、識別和殺傷能力。因此，APN是研究抗腫瘤藥物一個重要靶點，而同時這也要求開發(fā)高效的、高選擇性和低毒性的APN抑制劑。 基于對APN抑制劑的結(jié)構(gòu)以及酶一抑制劑復(fù)合物的結(jié)合模式的研究，利用tripos公司的sybyl7.0軟件進行分析和優(yōu)化，本文設(shè)計合成了以L-賴氨酸為骨架的兩個系列共二十個化合物。以N6-[(芐氧基)羰基]-L-賴氨酸為原料，經(jīng)甲酯化、?；?、再經(jīng)水解或氨解得到目標化合物。目標化合物的化學結(jié)構(gòu)均經(jīng)過紅外光譜，電噴霧質(zhì)

3、譜和核磁共振氫譜的確證。 目標化合物進行了體外抑制APN的活性研究，以L-亮氨酰-對硝基苯胺為底物，測定化合物對APN的抑制活性；試驗結(jié)果表明，本文所設(shè)計合成的大多數(shù)目標化合物均具有較好APN抑制活性，其中化合物B6的IC50為13．21aM(Bestatin=15.51μM)。初步構(gòu)效關(guān)系分析顯示：zn<'2+>螯合基團為羥肟酸的比羧酸的活性好；對于Rl基團來說，芳環(huán)不同或芳環(huán)上取代基不同對化合物的活性也有影響，六元芳環(huán)的活性

4、比五元芳環(huán)的好，芳環(huán)上有吸電子基取代的活性更好。 同時，也對目標化合物進行了體外抑制．MMP-2的活性試驗，以確定其對MMP與APN的選擇性，以琥珀酰明膠為底物，TNBSA為顯色劑，測定化合物對MMP-2的抑制活性；結(jié)果表明多數(shù)化合物對MMP-2的抑制活性要比APN強，其中化合物A2的IC<,50>為2.93，這可能是由于MMP-2的催化中心在酶的表面，而APN的催化中心在酶的內(nèi)部，抑制劑分子容易和MMP-2結(jié)合的原因；而對AP