酶生物色譜法在氨肽酶N抑制劑篩選中的應(yīng)用研究.pdf

1、氨肽酶N(APN)與原發(fā)腫瘤和繼發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)、血管生成密切相關(guān),甚至對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖分化過(guò)程亦起促進(jìn)作用,抑制APN的活性可以有效的阻斷腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,因此,APN已成為抗腫瘤藥物研究的靶點(diǎn)之一。酶生物色譜法是分子生物色譜法的一種,它以酶為色譜固定相,使效應(yīng)成分的分離與篩選結(jié)合在一起,可以從混合物中篩選特定的效應(yīng)成分。本課題以APN為靶點(diǎn),制備了新的APN固定相,建立了APN的酶生物色譜法,為抗腫瘤藥物的研究開(kāi)發(fā)提供了新的篩選模型。全

2、文分四章,主要研究工作和成果如下:
　　 1.采用組織提取法,以豬腎為原料,制備APN,采用鹽析、柱層析技術(shù)進(jìn)行了純化,并對(duì)其生物化學(xué)和有關(guān)酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,酶經(jīng)純化后比活為10.08 U/mg,酶得到了較好的分離純化,能滿足實(shí)驗(yàn)的要求。APN最適溫度為50℃,在50～55℃范圍內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定性；最適pH為7.8,偏弱堿性；陽(yáng)性抑制劑Bestatin的半數(shù)有效抑制濃度為10.35μM；以L-亮氨酰-p-硝基苯胺為底物,測(cè)

3、得其Km值為0.55 mM。
　　 2.制備硅膠整體柱,并進(jìn)行包覆和修飾,以其為載體對(duì)APN的固定化條件進(jìn)行了研究,并對(duì)固定化APN的性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明酶固定化的最佳pH為7.8,酶量為40 ml,反應(yīng)時(shí)間為6 h；酶經(jīng)固定化后,最適pH不變,仍為7.8,pH穩(wěn)定范圍增加,最適溫度為55℃,穩(wěn)定性增加。
　　 3.建立APN的酶生物色譜篩選模型,以Bestatin為陽(yáng)性對(duì)照,對(duì)模型進(jìn)行了驗(yàn)證,并采用此模型對(duì)35個(gè)新