基于L-組氨酸骨架的氨肽酶N抑制劑的設計,合成及活性研究.pdf

1、氨肽酶N（Aminopeptidase N，APN）(EC3.4.11.2)，與人類淋巴細胞表面分化抗原 CD13，屬同種物質，是一種 II型外肽酶，具有鋅離子依賴性，隸屬于M1家族。在其活性中心，具有高度保守的序列(HEXXH-X18-E)。在自然界，APN是一種廣泛存在的多功能的酶，在許多組織中都有表達，在腎、小腸刷狀緣膜高度表達。在腦、肺、血管組織也發(fā)現(xiàn)其存在。在許多轉移性的惡性腫瘤細胞中都檢測到APN的表達，如前列腺癌、黑色素瘤

2、、卵巢癌、腸癌、腎癌等，及非實體瘤，白血病和淋巴瘤。APN在腫瘤細胞的生長增殖、侵襲、遷移及血管生成等過程中發(fā)揮重要的作用，其抑制劑能夠有效的抑制腫瘤細胞活性，因此，APN成為開發(fā)抗腫瘤藥物的重要靶點。
　　本課題以大腸桿菌APN為靶點，以其活性位點結構和與 Bestatin的作用模式為基礎，借鑒已發(fā)表的小分子抑制劑結構，選取 L-組氨酸作為抑制劑的骨架結構，引入異羥肟酸作為鋅離子螯合基團，咪唑環(huán)和氨基N原子連接疏水性芳香側鏈，以

3、深入鋅離子兩側的疏水口袋?；诖怂悸?，設計了一系列L-組氨酸衍生物，借助計算機輔助藥物設計軟件Sybyl進行對接打分，選取打分較高的化合物進行合成。
　　本課題以L-組氨酸為起始原料，經過羧基成甲酯保護、Boc保護、N取代反應、去保護反應、?；磻苯夥磻?，得到最終目標化合物。關鍵中間體和目標化合物經核磁共振氫譜、離子阱質譜等確證結構。之后，對目標化合物進行了體外抑酶、抗腫瘤細胞增殖、抑制腫瘤細胞侵襲、遷移等初步生物活性測試。<

4、br>　　本課題共合成26個L-組氨酸衍生物。在體外抑酶活性測試中，多數(shù)化合物對APN具有一定的抑制作用，其中，化合物01b、01c、01e、02b、05c活性較高，接近于 Bestatin，01b的活性(IC50=3.51±0.44)甚至優(yōu)于陽性對照 Bestatin(IC50=10.41±1.68)。抑制ES-2、MDA-MB-231細胞表面APN的實驗中，除個別化合物，其他化合物對ES-2的抑制活性高于 MDA-MB-231。推測