阿利克侖對AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎損傷的作用研究.pdf

1、目的：腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-angiotensin system，RAS）失調(diào)在高血壓及高血壓腎臟損傷的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。腎素（renin）是啟動 RAS第一步的限速酶，對 RAS的活化有至關(guān)重要的作用。本研究通過觀察阿利克侖（Aliskiren）對人血管緊張素原-腎素（Angiotensinogen-renin，AGT-REN）雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠血壓、腎損傷指標以及循環(huán)和腎臟局部 RAS成分表達的變化，探討非肽類腎素抑

2、制劑阿利克侖對高血壓及腎臟損傷的影響及其作用機制。
　　方法：1動物分組及給藥方法：12只10月齡雄性AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠隨機分為高血壓對照組（HT組）和阿利克侖治療組（HT+Aliskiren組），每組6只，另選擇背景相同的6只野生型C57B6雄性小鼠作為正常對照組（WT）。給藥方法：單次給藥采用灌胃經(jīng)口途徑，分別給予5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg阿利克侖，監(jiān)測給藥后24h內(nèi)血壓；持續(xù)給藥通過皮下埋置微

3、量滲透泵，以20mg/kg/d對HT+Aliskiren組小鼠給予阿利克侖處理28d，其余兩組給予生理鹽水作為空白對照，期間監(jiān)測血壓，28d后取材，進行各項指標檢測。2動脈血壓監(jiān)測：采用無創(chuàng)尾套法測量各組小鼠在清醒與安靜狀態(tài)下給藥前后的平均動脈壓（MAP），觀察阿利克侖單次給藥后24h內(nèi)血壓以及持續(xù)給藥28d內(nèi)隔日血壓的變化。3腎功能損傷指標檢測：①考馬斯亮藍（CBB）結(jié)合法測定24h尿蛋白含量；②全自動生化分析儀測定血清肌酐、尿素；③

4、光鏡（HE、Masson染色）和電鏡觀察腎臟組織病理形態(tài)改變。4氧化應激反應指標檢測：化學發(fā)光法測定腎組織勻漿超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量以及蛋白免疫印跡法（Western blot, WB）檢測腎組織 p47phox蛋白表達變化。5 RAS成分表達變化檢測：ELISA法測定血清和腎組織勻漿AngⅡ和Ang(1-7)含量；WB檢測腎組織ACE、ACE2蛋白表達。
　　結(jié)果：1阿利克侖的降壓效果：與 WT小鼠比

5、較，HT組小鼠 MAP明顯升高；單次和持續(xù)給藥實驗均顯示，HT+Aliskiren組小鼠MAP均較HT組明顯降低。2 HT小鼠24h尿蛋白、血清尿素、肌酐均較 WT小鼠明顯升高；在 HT+Aliskiren組小鼠上述腎功能損傷指標較HT組明顯降低。3病理形態(tài)學結(jié)果顯示：光鏡下HT組小鼠腎臟實質(zhì)厚度較WT組明顯變薄，HT+Aliskiren組上述病理損傷得到改善。與WT小鼠比較，HT組小鼠腎小球硬化面積評分和腎間質(zhì)損傷評分明顯增加，HT+

6、Aliskiren組評分結(jié)果較 HT組降低。電鏡下，HT小鼠腎小球基底膜增厚，足突融合甚至消失，腎小管上皮細胞胞漿內(nèi)線粒體水腫、空泡變性，間質(zhì)可見大量膠原纖維沉積，；HT+Aliskiren組小鼠腎臟上述病變較HT組明顯減輕。4與WT小鼠比較，HT小鼠腎臟組織SOD活性降低，MDA生成增加，p47phox蛋白表達明顯增多；與HT組小鼠比較，HT+Aliskiren組小鼠腎臟組織SOD活性增加，MDA的生成減少，p47phox蛋白表達明顯

7、減少。5與 WT組比較，HT組小鼠 ACE蛋白表達增加，ACE2蛋白表達下降，AngⅡ/ Ang(1-7)比值增加；與HT組小鼠相比，阿利克侖可下調(diào) HT小鼠腎組織 ACE蛋白表達，上調(diào) ACE2表達，降低血漿和腎組織AngⅡ/Ang(1-7)比值。
　　結(jié)論：1阿利克侖具有良好的降壓效果及腎臟保護作用。2阿利克侖通過抑制AngⅡ的生成，降低腎臟局部 AngⅡ/ Ang(1-7)比值，維持腎臟局部 RAS穩(wěn)態(tài)平衡。3腎素抑制劑從源