高血壓小鼠腎組織基因表達譜分析及阿利克侖的腎臟保護作用機制探討.pdf

1、目的：通過基因表達譜芯片篩選人血管緊張素原-腎素（Angiotensinogen-renin， AGT-REN）雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎臟差異表達基因，并通過進一步研究腎素抑制劑阿利克侖對AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎臟AT1、Mas和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Ets1（E26transformation-specific-1， Ets1）、骨橋蛋白（Osteopontin， OPN）及NADPH氧化酶2（NADPH oxidase2，NOX2）、N

2、OX4、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS）的影響，探討阿利克侖對高血壓腎損傷發(fā)揮保護作用的作用機制。
　　方法：第一部分：1動物分組：3只10月齡雄性 AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠為高血壓組（HT組），3只背景相同的野生型 C57B6小鼠作為正常對照組（WT組）。2動脈血壓監(jiān)測：采用無創(chuàng)尾套法測量各組小鼠平均動脈壓（Mean artery pressure，MAP），

3、觀察各組小鼠連續(xù)29d內(nèi)隔日血壓的變化。3用小鼠全基因組基因芯片篩選AGT-REN高血壓小鼠與WT小鼠相比腎臟的差異表達基因。4蛋白免疫印跡法（Western blot，WB）驗證基因芯片結(jié)果。第二部分：1動物分組及給藥方法：12只10月齡雄性AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠隨機分為高血壓對照組（HT組）和阿利克侖治療組（HT+Aliskiren組），每組6只，另選擇背景相同的6只野生型 C57B6雄性小鼠作為正常對照組（WT組）。通過

4、腹腔注射給藥，以20mg/kg/d對 HT+Aliskiren組小鼠給予阿利克侖處理28天，其余兩組給予等量生理鹽水作為對照，期間監(jiān)測血壓，28天后取材，檢測各項指標(biāo)。2用光鏡和電鏡觀察腎組織病理形態(tài)的變化。3 WB方法檢測腎組織Ets1、OPN和RAS組分AT1、Mas受體及氧化應(yīng)激指標(biāo)NOX2、NOX4、iNOS的表達。
　　結(jié)果：第一部分：1、AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠血壓：與WT組小鼠比較，HT組小鼠 MAP明顯升高

5、。2、芯片結(jié)果數(shù)據(jù)分析：①差異表達基因的篩選：用小鼠全基因組基因芯片從33696個基因中發(fā)現(xiàn)HT組小鼠與WT組小鼠相比腎臟的差異表達基因36個。其中在三組中均上調(diào)的基因有 Ets1、OPN等20個，均下調(diào)的基因有Bcat1等16個。②基因芯片的生物學(xué)功能：分子功能分析中上調(diào)的基因有16個，下調(diào)的基因有9個；生物學(xué)途徑分析中上調(diào)的基因14個，下調(diào)的基因7個；細胞組件分析中上調(diào)的基因14個，下調(diào)的基因7個。③基因芯片的通路分析：KEGG通路

6、分析中發(fā)現(xiàn)差異表達基因主要參與了花生四烯酸代謝、脂肪酸代謝、腎細胞癌等生物過程。5、基因芯片結(jié)果驗證：Western blot結(jié)果顯示Ets1、OPN表達水平明顯升高，與基因芯片表達結(jié)果一致。第二部分：1、血壓：與 WT組小鼠相比，HT組小鼠 MAP明顯升高；給予阿利克侖治療后，HT+Aliskiren組小鼠 MAP較 HT組明顯下降。2、腎組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果：光鏡下觀察腎組織 HE染色，WT組腎小球系膜基質(zhì)無增生，間質(zhì)無炎細胞浸潤，腎

7、小管結(jié)構(gòu)正常，未見蛋白管型；HT組可見腎小球皺縮硬化，大部分毛細血管管壁增厚，可見玻璃樣變，腎小管萎縮脫落，并可見蛋白管型，腎間質(zhì)可見炎細胞浸潤；HT+Aliskiren組上述病變明顯改善。電鏡下，WT組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整，結(jié)構(gòu)清晰，腎小管上皮細胞線粒體豐富，排列整齊；HT組小鼠腎小球基底膜增厚，足突融合或消失，腎小管上皮細胞線粒體水腫、空泡變性，排列紊亂，間質(zhì)可見大量膠原纖維形成；HT+Aliskiren組小鼠腎臟上述病變較 HT組顯

8、著減輕。3、WB結(jié)果：與 WT組比較，HT組小鼠腎臟轉(zhuǎn)錄因子Ets1、OPN及AT1受體表達明顯升高，Mas受體表達明顯降低，NOX2、NOX4、iNOS表達升高；HT+Aliskiren組較 HT組，下調(diào)了 Ets1、OPN及 AT1受體及NOX2、NOX4、iNOS的表達，上調(diào)了Mas受體。
　　結(jié)論：1、腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活可誘導(dǎo)多基因表達，參與高血壓腎損傷的發(fā)生發(fā)展。2、AngⅡ-Ets1-OPN通路及 AngⅡ-N