新型疫苗佐劑胞外UTP、UDP及甘露寡糖佐劑效應研究.pdf

1、迅猛發(fā)展的現(xiàn)代生物學技術，不斷開發(fā)出了諸如合成肽疫苗、基因重組亞單位疫苗、抗獨特型抗體疫苗、核酸疫苗等的新型疫苗。新型疫苗具有抗原純度高，相對分子量小，疫苗的不良反應低的優(yōu)勢，但是我們不能否認新型疫苗存在免疫原性低，無法激發(fā)機體有效免疫應答的缺點。為了達到令人滿意的免疫刺激原性，增強疫苗誘導機體免疫反應的能力，需要在疫苗中加入具有佐劑效應的物質(zhì)。疫苗佐劑是現(xiàn)在新型疫苗研究的重要領域，理想疫苗佐劑應該具備安全、有效、化學組成明確、能誘導細

2、胞免疫、可降解、無免疫原性等特點。當前，獲準用于人體的疫苗佐劑并不多，其中應用最為廣泛的是經(jīng)典的鋁佐劑。鋁鹽佐劑能夠誘導機體發(fā)揮顯著的免疫增強效應，是依靠免疫刺激作用和儲庫作用實現(xiàn)的，其也是唯一全球范圍內(nèi)公認的人用疫苗佐劑。但鋁佐劑與許多重組或合成的多肽疫苗共同免疫時未能激發(fā)有效的免疫應答，并存在不能凍干;不能誘導有效細胞免疫;注射部位會出現(xiàn)紅斑、結節(jié)、肉芽腫性炎癥和接觸性過敏等局部嚴重反應，使之難以滿足新型疫苗發(fā)展的需要。
　　

3、我國是肝炎大國，病毒性肝炎在人群中的感染率很高，對公共衛(wèi)生安全構成了嚴重危害。目前市場上銷售的含鋁佐劑的乙肝表面抗原重組疫苗是有效的預防疫苗，但是存在誘導的細胞免疫應答不足;接種乙肝疫苗后，接種者不產(chǎn)生有效的保護性抗體;漏種率高等問題。本研究選用了兩種抗原，一種是免疫原性較弱的基因工程乙肝表面抗原(HepatitisBsurfaceantigen，HBsAg)，一種是免疫原性較強的傳統(tǒng)病毒顆粒甲肝抗原(HepatitisAvirus，H

4、AV)。同時，基于PollyMatzinger提出的危險信號模式理論和當前對嘌呤受體、甘露糖受體的研究，選用了尿苷三磷酸(Uridinetriphosphate，UTP)、尿苷二磷酸(Uridinediphosphate，UDP)和甘露寡糖(Mannanoligosaccharides，MOS)三種物質(zhì)作為新型疫苗佐劑，初步探討這三種物質(zhì)對HBsAg和HAV抗原體液免疫應答的影響。實驗中分別用不同劑量的UTP、UDP與HAV抗原和HBs

5、Ag共同免疫ICR小鼠;不同劑量的MOS與HAV抗原共同免疫ICR小鼠。實驗分別設空白對照（生理鹽水）組、單純HAV抗原對照組、單純HBsAg抗原對照組、單純鋁佐劑對照組和UTP+鋁佐劑組、UDP+鋁佐劑組、MOS+鋁佐劑組、UTP+MOS組、UDP+MOS組各復合佐劑組。經(jīng)間接ELISA法分別檢測抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG，得到不同時間點各實驗組小鼠的抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG效價水平。
　　本研究經(jīng)初步

6、探索得出UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能顯著增強抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG水平的結果。并證實了，UTP實驗組中UTP+鋁佐劑復合佐劑組產(chǎn)生的抗-HAVIgG水平最高，對HAV的體液免疫增強效應明顯優(yōu)于單純抗原對照組、單純鋁佐劑對照組和單純UTP佐劑組(P＜0.05);UDP實驗組中UDP+鋁佐劑復合佐劑組產(chǎn)生的抗-HBsAgIgG水平最高，對HBsAg的體液免疫增強效應明顯優(yōu)于單純抗原對照組、單純鋁佐劑對照組和單純UDP佐

7、劑組(P＜0.05);MOS實驗組中UDP、UTP分別同MOS聯(lián)合使用時，均表現(xiàn)出了協(xié)同增效的作用，其增強HAV特異性體液免疫應答的效果均高于單純抗原對照組、單純鋁佐劑對照組和單純使用MOS組，但差異無統(tǒng)計意義(P＞0.05)。在所設置的濃度梯度中，UDP、UTP的最佳劑量濃度均是2mg;MOS的最佳劑量濃度時1mg。
　　在佐劑的安全性試驗中，UTP、UDP和MOS的最佳劑量組小鼠和10mg/只劑量的BALB/C小鼠的病理切片均

8、未發(fā)現(xiàn)異常;試驗期中小鼠未出現(xiàn)顫栗、抽搐、痙攣、呼吸困難、水腫及休克等異常反應;進食、排泄和精神等均未發(fā)現(xiàn)異常;注射部位無紅腫、結節(jié)。研究結果初步顯示:UTP、UDP和MOS安全性較好，在實驗期間動物未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應。
　　本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能有效增強特異性體液免疫應答，同鋁佐劑復合使用還表現(xiàn)出不同的協(xié)同增效作用;單純MOS增強HAV抗原的特異性體液免疫應答效果還略優(yōu)于單純鋁佐劑。這些研究為新型