新型疫苗佐劑胞外UTP、UDP及甘露寡糖佐劑效應(yīng)研究.pdf

1、迅猛發(fā)展的現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，不斷開發(fā)出了諸如合成肽疫苗、基因重組亞單位疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗、核酸疫苗等的新型疫苗。新型疫苗具有抗原純度高，相對(duì)分子量小，疫苗的不良反應(yīng)低的優(yōu)勢(shì)，但是我們不能否認(rèn)新型疫苗存在免疫原性低，無法激發(fā)機(jī)體有效免疫應(yīng)答的缺點(diǎn)。為了達(dá)到令人滿意的免疫刺激原性，增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)的能力，需要在疫苗中加入具有佐劑效應(yīng)的物質(zhì)。疫苗佐劑是現(xiàn)在新型疫苗研究的重要領(lǐng)域，理想疫苗佐劑應(yīng)該具備安全、有效、化學(xué)組成明確、能誘導(dǎo)細(xì)

2、胞免疫、可降解、無免疫原性等特點(diǎn)。當(dāng)前，獲準(zhǔn)用于人體的疫苗佐劑并不多，其中應(yīng)用最為廣泛的是經(jīng)典的鋁佐劑。鋁鹽佐劑能夠誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)揮顯著的免疫增強(qiáng)效應(yīng)，是依靠免疫刺激作用和儲(chǔ)庫作用實(shí)現(xiàn)的，其也是唯一全球范圍內(nèi)公認(rèn)的人用疫苗佐劑。但鋁佐劑與許多重組或合成的多肽疫苗共同免疫時(shí)未能激發(fā)有效的免疫應(yīng)答，并存在不能凍干;不能誘導(dǎo)有效細(xì)胞免疫;注射部位會(huì)出現(xiàn)紅斑、結(jié)節(jié)、肉芽腫性炎癥和接觸性過敏等局部嚴(yán)重反應(yīng)，使之難以滿足新型疫苗發(fā)展的需要。
　　

3、我國是肝炎大國，病毒性肝炎在人群中的感染率很高，對(duì)公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了嚴(yán)重危害。目前市場上銷售的含鋁佐劑的乙肝表面抗原重組疫苗是有效的預(yù)防疫苗，但是存在誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答不足;接種乙肝疫苗后，接種者不產(chǎn)生有效的保護(hù)性抗體;漏種率高等問題。本研究選用了兩種抗原，一種是免疫原性較弱的基因工程乙肝表面抗原(HepatitisBsurfaceantigen，HBsAg)，一種是免疫原性較強(qiáng)的傳統(tǒng)病毒顆粒甲肝抗原(HepatitisAvirus，H

4、AV)。同時(shí)，基于PollyMatzinger提出的危險(xiǎn)信號(hào)模式理論和當(dāng)前對(duì)嘌呤受體、甘露糖受體的研究，選用了尿苷三磷酸(Uridinetriphosphate，UTP)、尿苷二磷酸(Uridinediphosphate，UDP)和甘露寡糖(Mannanoligosaccharides，MOS)三種物質(zhì)作為新型疫苗佐劑，初步探討這三種物質(zhì)對(duì)HBsAg和HAV抗原體液免疫應(yīng)答的影響。實(shí)驗(yàn)中分別用不同劑量的UTP、UDP與HAV抗原和HBs

5、Ag共同免疫ICR小鼠;不同劑量的MOS與HAV抗原共同免疫ICR小鼠。實(shí)驗(yàn)分別設(shè)空白對(duì)照（生理鹽水）組、單純HAV抗原對(duì)照組、單純HBsAg抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和UTP+鋁佐劑組、UDP+鋁佐劑組、MOS+鋁佐劑組、UTP+MOS組、UDP+MOS組各復(fù)合佐劑組。經(jīng)間接ELISA法分別檢測抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG，得到不同時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組小鼠的抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG效價(jià)水平。
　　本研究經(jīng)初步

6、探索得出UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能顯著增強(qiáng)抗-HAVIgG和抗-HBsAgIgG水平的結(jié)果。并證實(shí)了，UTP實(shí)驗(yàn)組中UTP+鋁佐劑復(fù)合佐劑組產(chǎn)生的抗-HAVIgG水平最高，對(duì)HAV的體液免疫增強(qiáng)效應(yīng)明顯優(yōu)于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純UTP佐劑組(P＜0.05);UDP實(shí)驗(yàn)組中UDP+鋁佐劑復(fù)合佐劑組產(chǎn)生的抗-HBsAgIgG水平最高，對(duì)HBsAg的體液免疫增強(qiáng)效應(yīng)明顯優(yōu)于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純UDP佐

7、劑組(P＜0.05);MOS實(shí)驗(yàn)組中UDP、UTP分別同MOS聯(lián)合使用時(shí)，均表現(xiàn)出了協(xié)同增效的作用，其增強(qiáng)HAV特異性體液免疫應(yīng)答的效果均高于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純使用MOS組，但差異無統(tǒng)計(jì)意義(P＞0.05)。在所設(shè)置的濃度梯度中，UDP、UTP的最佳劑量濃度均是2mg;MOS的最佳劑量濃度時(shí)1mg。
　　在佐劑的安全性試驗(yàn)中，UTP、UDP和MOS的最佳劑量組小鼠和10mg/只劑量的BALB/C小鼠的病理切片均

8、未發(fā)現(xiàn)異常;試驗(yàn)期中小鼠未出現(xiàn)顫栗、抽搐、痙攣、呼吸困難、水腫及休克等異常反應(yīng);進(jìn)食、排泄和精神等均未發(fā)現(xiàn)異常;注射部位無紅腫、結(jié)節(jié)。研究結(jié)果初步顯示:UTP、UDP和MOS安全性較好，在實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應(yīng)。
　　本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能有效增強(qiáng)特異性體液免疫應(yīng)答，同鋁佐劑復(fù)合使用還表現(xiàn)出不同的協(xié)同增效作用;單純MOS增強(qiáng)HAV抗原的特異性體液免疫應(yīng)答效果還略優(yōu)于單純鋁佐劑。這些研究為新型