C族GPCRs配體識(shí)別及標(biāo)記研究.pdf

1、G蛋白偶聯(lián)受體GPCRs是最大的一類(lèi)膜受體家族，它能介導(dǎo)由激素，神經(jīng)遞質(zhì)和感覺(jué)刺激等不同的細(xì)胞外配體所引發(fā)的細(xì)胞應(yīng)答，是極其重要的藥物靶點(diǎn)。mGluRs和GABAB受體屬于GPCR C家族，它們?cè)诠劝彼崮芗唉冒被∷崮艿纳窠?jīng)突觸中均有表達(dá)，在突觸前或突觸后水平上參與調(diào)控多種生理過(guò)程，并與神經(jīng)分裂，抑郁，癲癇，痙攣以及藥物成癮等多種疾病的發(fā)生相關(guān)。和其他GPCRs相比，C族GPCR在七次跨膜核心結(jié)構(gòu)之外有一個(gè)巨大的胞外結(jié)構(gòu)域，其包含一個(gè)配

2、體結(jié)合口袋（LBP）用于配體的識(shí)別和結(jié)合。
　　對(duì)GPCRs藥理學(xué)特性的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究表明，它們的配體識(shí)別位點(diǎn)在進(jìn)化過(guò)程中存在保守性和變異性。保守性表現(xiàn)在不同種屬來(lái)源的受體能夠識(shí)別相同的內(nèi)源性配體，而變異性表現(xiàn)為不同種屬來(lái)源的受體識(shí)別相同配體后展現(xiàn)出不同的藥理學(xué)特性，或是在配體識(shí)別位點(diǎn)發(fā)生了突變從而改變了對(duì)配體的識(shí)別能力。為了更好的研究受體對(duì)配體的識(shí)別機(jī)制及這種能力在進(jìn)化過(guò)程中的保守與差異，開(kāi)發(fā)具有種屬間受體特異性的藥物，有必要對(duì)

3、不同種屬來(lái)源的受體的配體識(shí)別與功能差異進(jìn)行比較。mXR以及Dro-GABABR分別是mGluRs受體和GABAB受體在昆蟲(chóng)中的同源受體，對(duì)這兩類(lèi)受體的研究表明它們的配體識(shí)別位點(diǎn)在進(jìn)化過(guò)程中出現(xiàn)了差異。本課題的第一部分我們克隆了幾種昆蟲(chóng)中的mXR和果蠅中的Dro-GABABR，利用功能檢測(cè)手段對(duì)不同化合物庫(kù)中的藥物進(jìn)行了激動(dòng)劑和拮抗劑的篩選，并通過(guò)對(duì)一種mXR的配體-LBP相互作用的分子對(duì)接和3D建模確認(rèn)了mXR中配體與LBP的相互作用方

4、式。
　　在GPCRs的功能研究中，由于抗體特異性較差，對(duì)于受體在活細(xì)胞中的標(biāo)記一直是一大難題。基于此，在本課題第二部分的研究中，我們以配體和受體的特異性識(shí)別為原則，設(shè)計(jì)合成了以GABAB受體的配體CGP64213為母核的光親和探針，該探針可以特異性的標(biāo)記活細(xì)胞膜表面的GABAB受體。利用探針中的熒光標(biāo)簽聯(lián)合一套有效的毛細(xì)管電泳單細(xì)胞蛋白分析裝置可以在單個(gè)傳代細(xì)胞或原代神經(jīng)元中特標(biāo)記并檢測(cè)膜蛋白GABAB受體GB1亞基的各種剪切異