血管性癡呆大鼠7B2、PC2在海馬區(qū)的表達及苯酞干預的影響研究.pdf

1、目的:
　　 本研究建立在Wistar大鼠血管性癡呆的模型基礎上，結合病理、行為學、分子生物學和藥物干預等方面，檢測在血管性癡呆大鼠海馬中7B2、PC2的表達變化，觀察丁苯酞對血管性癡呆大鼠學習記憶能力以及海馬中7B2、PC2表達的影響，探討丁苯酞對血管性癡呆的可能的治療新機制。
　　 方法:
　　 12-14周齡的健康雄性Wistar大鼠80只，體重約250g-300g，隨機分為3組:假手術組(n=16)，血管

2、性癡呆模型組(n=32)，丁苯酞干預組(n=32)。根據(jù)造模后3天(3d)、1周(1w)、2周(2w)、4周(4w)四個不同的時間點將血管性癡呆模型組、丁苯酞干預組隨機分為四個亞組，每個亞組8只。以雙側頸動脈永久結扎法（2-VO法）制作血管性癡呆模型，分離大鼠雙側頸動脈，假手術組只分離不結扎，模型組、丁苯酞干預組永久結扎雙側頸動脈。丁苯酞干預組于手術當日起即灌胃相應劑量的丁苯酞，模型組灌注等量的生理鹽水，假手術組不給藥。采用HE染色觀察

3、病理學變化;應用免疫組織化學檢測7B2、PC2免疫陽性細胞表達水平的動態(tài)變化，利用逆轉錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測海馬組織中7B2mRNA、PC2mRNA的表達。假手術組、模型組4周亞組、丁苯酞干預組4周亞組大鼠于手術后第24天開始行Morris水迷宮試驗，測試學習記憶能力，手術后第28天處死大鼠。數(shù)據(jù)以均數(shù)(±)標準差((x)±s)表示，運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結果:
　　 1.Mor

4、ris水迷宮試驗
　　 假手術組、模型組4周亞組、丁苯酞干預組4周亞組大鼠于術后第24、25、26、27天分別測試Morris水迷宮定位航行試驗，以逃避潛伏期作為學習成績，于術后28天行空間探索試驗，以穿越平臺次數(shù)作為記憶成績。
　　 模型組大鼠的學習和記憶能力均下降，具體表現(xiàn)為逃避潛伏期的時間明顯延長，分別為(87.23±4.69，71.32±5.35，42.55±4.26，39.76±3.47)秒，穿越目標平臺的次數(shù)

5、最少，為(4.45±1.63)次。假手術組大鼠逃避潛伏期最短，分別為(50.22±7.27，31.45±4.23，18.73±4.51，11.34±2.18)秒，穿越目標平臺的次數(shù)最多，為(8.64±1.52)次。丁苯酞干預組居中，逃避潛伏期分別為(62.32±3.16，42.54±4.83，32.34±5.82，19.94±3.51)秒，穿越目標平臺的次數(shù)為(6.98±1.45)次。定位航行試驗:模型組逃避潛伏期較假手術組明顯延長，差

6、異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01），丁苯酞干預組較模型組逃避潛伏期縮短，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);空間探索試驗:模型組穿越平臺所在位置的次數(shù)明顯少于假手術組及丁苯酞干預組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 2.病理形態(tài)學觀察
　　 假手術組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結構清晰，排列緊密，細胞核圓而大，核仁清晰，與周圍神經(jīng)元界限清楚，細胞結構完整;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂、稀疏，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，

7、細胞水腫明顯，細胞核固縮、深染，結構不清;丁苯酞干預組神經(jīng)元數(shù)量較多，排列尚規(guī)則，無明顯水腫帶，細胞核較圓，核仁清晰，僅見少量固縮變性的神經(jīng)元，結構較清晰。
　　 3.免疫組織化學結果
　　 7B2在假手術組海馬CA1區(qū)可見明顯表達，模型組3天亞組、1周亞組、2周亞組、4周亞組7B2蛋白的表達水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達水平最低。模型組各亞組7B2的表達與假手術組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;丁苯酞干

8、預組各亞組海馬CA1區(qū)7B2蛋白的表達量明顯高于模型組各亞組相應數(shù)值(P＜0.05)，7B2表達的趨勢與模型組大致相同。
　　 PC2在假手術組海馬CA1區(qū)可見明顯表達，與假手術組相比較，血管性癡呆模型3天亞組PC2表達水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），之后呈下降趨勢，1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2蛋白的表達水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達水平最低。模型組1周亞組、2周亞組、4周亞組與假手術組相比，差

9、異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);丁苯酞干預組3天亞組與模型組3天亞組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。丁苯酞干預組1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2蛋白的表達量明顯高于模型組各時間點相應數(shù)值（P＜0.05），PC2表達的趨勢與模型組大致相同。
　　 4.RT-PCR檢測結果
　　 假手術組大鼠海馬CA1區(qū)可見明顯7B2mRNA的表達。模型組3天亞組、1周亞組、2周亞組、4周亞組7B2mRNA表達水平明顯減低，其中以

10、模型組2周亞組表達水平最低。各亞組與假手術組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;而丁苯酞干預組各亞組較相應模型組各亞組7B2mRNA的表達明顯增加（P＜0.05）。
　　 假手術組大鼠海馬CA1區(qū)PC2mRNA可見明顯表達，模型組3天亞組較假手術組表達水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。模型組1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2mRNA表達水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達水平最低。模型組1周亞組、2周亞組

11、、4周亞組與假手術組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;丁苯酞干預組3天亞組與模型組3天亞組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而丁苯酞干預組1周亞組、2周亞組、4周亞組較相應模型組各亞組PC2mRNA的表達明顯增加（P＜0.05）。
　　 結論:
　　 1.血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元7B2、PC2的表達明顯減少。
　　 2.丁苯酞可能是通過誘導血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元7B2表達的上調，進而上調PC2的表達