Hippo-YAP通路在胃癌中的表達及機制探討.pdf

1、目的：檢測Hippo-YAP通路在胃癌中的表達并探討其可能的機制，探討胃癌的發(fā)病機制，尋找胃癌基因治療的潛在靶點。
　　 材料與方法：收集正常胃粘膜組織，胃腺瘤與胃癌的組織標本共163例，在三個實驗組中，應用免疫組織化學染色法檢測Hippo通路核心蛋白Mst1/2，Sav1以及Lats1/2的表達；應用免疫組織化學染色法、Western-blot以及RT-RCR檢測YAP蛋白質及mRNA的表達；應用甲基特異性PCR檢測YAP基因

2、甲基化水平；培養(yǎng)胃癌細胞系SGC-7901，應用RNA干擾技術制備YAP SiRNA慢病毒載體并轉染胃癌細胞系SGC-7901，MTT法檢測YAP SiRNA對胃癌細胞系SGC-7901增殖的影響。
　　 結果：1.Mst1/2及Lats1在胃癌中的表達明顯低于正常胃粘膜及胃腺瘤，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達無統(tǒng)計學差異；Sav1在正常胃粘膜，胃腺瘤及胃癌中的表達并無統(tǒng)計學差異，Sav1及Lats1在有淋巴結轉移的胃癌組織中的表

3、達明顯低于無淋巴結轉移的胃癌組織。2.免疫組化染色顯示：非磷酸化YAP蛋白主要為細胞核表達，在胃癌中的表達明顯高于正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達無統(tǒng)計學差異；磷酸化YAP蛋白主要為漿表達，在正常胃粘膜，胃腺瘤及胃癌中的表達無統(tǒng)計學差異。Western-blot結果顯示：YAP蛋白在胃癌中的表達明顯高于在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達無統(tǒng)計學差異；RT-PCR結果顯示：YAP mRNA在

4、胃癌中的表達明顯高于在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達，正常胃粘膜及胃腺瘤中YAP mRNA的表達無統(tǒng)計學差異；3胃癌中YAP基因甲基化頻率明顯低于正常胃粘膜及胃腺瘤，呈低甲基化狀態(tài)；正常胃粘膜及胃腺瘤中YAP甲基化頻率無統(tǒng)計學差異。4.成功構建YAP SiRNA慢病毒載體，轉染胃癌細胞系SGC-7901并有效敲減細胞系中YAP的表達，MTT法檢測顯示YAP基因沉默可明顯抑制胃癌細胞系SGC-7901的增殖。
　　 結論：1.Hipp