甲狀腺激素對生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血早產(chǎn)兔治療的實驗研究.pdf

1、目的:
　　生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(germinal matrix hemorrhage-intraventricularhemorrhage，GM-IVH)是造成早產(chǎn)兒獲得性腦損傷的常見原因之一，至少占了新生兒顱內(nèi)出血的80％以上。據(jù)文獻報道在胎齡＜32周或（和）出生體重＜1500g的早產(chǎn)兒中GM-IVH的發(fā)生率為20％～40％。我國早產(chǎn)兒GM-IVH的發(fā)生率大約為56.6％，明顯高于發(fā)達國家，其中重度出血的發(fā)生率為16.3％;大

2、約35％的存活患兒伴有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。通過顱腦核磁共振影像學研究顯示該病的病理學表現(xiàn)包括腦室周圍深部腦白質(zhì)局灶性壞死，囊性空洞形成，彌漫性腦白質(zhì)軟化，腦白質(zhì)萎縮以及腦室擴大，神經(jīng)系統(tǒng)組織學基礎(chǔ)為少突膠質(zhì)細胞髓鞘化延遲。目前對于GM-IVH造成的髓鞘化障礙、繼發(fā)的不良神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)局沒有行之有效的治療手段。有相關(guān)文獻報道，創(chuàng)傷、炎癥等疾病會影響腦組織中甲狀腺激素脫碘酶的表達，進而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)甲狀腺激素的生物學功能。已有大量研

3、究證實甲狀腺激素可以促進多發(fā)性硬化等脫髓鞘疾病患者少突膠質(zhì)前體細胞成熟、髓鞘形成，減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。甲狀腺激素是否也可以通過上述機制促進早產(chǎn)兒GM-IVH后腦損傷的修復(fù)？關(guān)于這方面的研究鮮見報道。
　　本文試圖通過動物模型探討:(1) GM-IVH早產(chǎn)兔腦室周圍組織甲狀腺激素信號通路中相關(guān)蛋白的表達水平;(2)甲狀腺激素干預(yù)治療對上述相關(guān)蛋白表達的影響;(3)甲狀腺激素是否可以促進GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中髓鞘磷脂堿性蛋白(m

4、yelin basic protein，MBP)的表達。
　　方法:
　　1、選擇孕29天孕兔進行剖宮產(chǎn)（足月為孕32天），迅速取幼兔，共60只，給予保溫、奶粉喂養(yǎng)。將所有幼兔隨機分為正常組、單純GM-IVH模型組（簡稱模型組），GM-IVH模型+甲狀腺激素干預(yù)組（簡稱模型+甲狀腺激素組），每組各20只。參照腹腔注射丙三醇誘發(fā)GM-IVH的方法，模型制備方法如下:于生后3小時內(nèi)給早產(chǎn)兔腹腔注射50％丙三醇，劑量為10ml/k

5、g，24小時后行顱腦超聲篩查，模型+甲狀腺激素組中發(fā)生GM-IVH早產(chǎn)兔腹腔注射甲狀腺激素，即三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine，T3)，劑量為20μg/kg·d，1/日。進行上述操作同時，正常組早產(chǎn)兔腹腔注射等體積的生理鹽水，24小時后行顱腦超聲篩查。
　　2、將以上三組中的早產(chǎn)兔隨機分為出生后3天、7天、14天三個亞組，按上述時間點給予安樂死，冰上迅速分離腦組織，觀察大體標本，選取腦室周邊區(qū)域組織，一部分置于-8

6、0℃冰箱中備用，一部分置于4％多聚甲醛溶液中備用，分別供蛋白印跡、免疫組化實驗使用。
　　3、使用蛋白印跡的方法比較三組各個時間點早產(chǎn)兔腦室周邊組織中2型甲狀腺激素脫碘酶(type2 iodothyronine deiodinase，D2)、3型甲狀腺激素脫碘酶(type3 iodothyronine deiodinase，D3)的表達;采用免疫組化的方法比較三組中各個時間點上早產(chǎn)兔腦室周邊中MBP的表達情況。
　　4、統(tǒng)計

7、方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件、Microsoft Excel2003進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差表示，經(jīng)方差齊性檢驗方差齊，多個樣本均數(shù)的比較采用LSD-t法檢驗，若不滿足方差齊性則采用秩和檢驗的方法。檢驗水準定為0.05，P值＜0.05有統(tǒng)計學意義，P＜0.01時具有顯著差異。
　　結(jié)果:
　　1、成功復(fù)制了早產(chǎn)兔GM-IVH模型
　　成功對孕29天的實驗兔（孕足月為32天）行剖宮產(chǎn)獲得早產(chǎn)兔。通過頭

8、顱超聲、大體標本觀察、組織HE染色觀察證實早產(chǎn)兔GM-IVH模型的成功制備。
　　2、早產(chǎn)兔腦組織中D2、D3的表達
　　在出生后3-14天，正常組早產(chǎn)兔腦組織中D2的表達量逐漸增加，模型組早產(chǎn)兔腦組織標本中D2的表達量逐漸減少，且在相同時間上均低于正常組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;在出生后3-14天，正常組早產(chǎn)兔腦組織標本中D3的表達量逐漸升高，模型組早產(chǎn)兔腦組織標本中D3的表達量逐漸增加，且在相同時間上均高于正

9、常組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　模型+甲狀腺激素組早產(chǎn)兔腦組織中D2表達量在7天、14天時均高于模型組的表達量，但低于正常組的表達量，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);模型+甲狀腺激素組早產(chǎn)兔腦組織中D3表達量在3天、7天、14天時均低于模型組的表達量，但高于正常組的表達量，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　3、腦組織中MBP的表達
　　模型組早產(chǎn)兔腦組織標本中MBP的表達在出生后3天、7天、14

10、天逐漸降低，在相同時間上均低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);模型+甲狀腺激素組MBP的表達在出生后14天后高于模型組的表達量，低于正常組中的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;但出生后3天、7天，模型組和模型+甲狀腺激素組腦組織中MBP的表達率無差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后，腦組織內(nèi)D2的表達量隨著時間的變化明顯減少，腦組織內(nèi)D3的表達量隨著時間的變化明顯增多，MBP的表達