大鼠鮑曼不動桿菌膿毒癥血清細胞因子及肝臟組織的變化.pdf

1、目的： 通過制作大鼠鮑曼不動桿菌膿毒癥模型，來研究探討該模型大鼠血清中TNF-α、IL-18、羥自由基等量的變化及膿毒癥時肝臟組織及功能的改變，進一步探索鮑曼不動桿菌膿毒癥發(fā)病過程中機體改變奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.清潔級SD雄性大鼠60只，隨機分為6組，每組10只。第1組：正常對照組(NC組)，10％水合氯醛0.3ml/100g腹腔麻醉后活殺；第2～6組：鮑曼不動桿菌膿毒癥組(AB組)，經(jīng)腹腔注射(Ip)鮑曼不動

2、桿菌懸液，細菌濃度為9×108cfu/ml，注射劑量為1.5ml/100g大鼠體重，建立大鼠鮑曼不動桿菌膿毒癥模型。AB組大鼠分別在注射鮑曼不動桿菌后4h、16h、24h、48h、72h時，10％水合氯醛0.3ml/100g腹腔麻醉后活殺，每時相點動物數(shù)均為10只。取部分肝臟，置于10％福爾馬林液中固定。所有大鼠在活殺后均無菌采下腔靜脈血5～7ml，其中1ml采用肝素抗凝，送檢血常規(guī)，其余部分待凝固后分離血清(3000rpm/min，5

3、min)，部分用于檢測肝功能，其余-20℃保存?zhèn)溆谩?2.觀察AB組大鼠在染菌后的呼吸、進食、活動、精神狀態(tài)等情況的改變，并監(jiān)測大鼠體溫的變化。 3.隨機取AB組大鼠，無菌采血后予常規(guī)血培養(yǎng)鮑曼不動桿菌。 4.取1ml抗凝血送檢血常規(guī)，取2ml經(jīng)3000rpm/min離心5min的血清送檢肝功能。 5.HE染色與組織學觀察：肝臟組織切片經(jīng)蘇木精-曙紅染色后普通光學顯微鏡(LM)下觀察肝臟組織病理學上的改變

4、。 6.使用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定各組大鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-18(IL-18)的含量。 7.利用比色法測定各組大鼠血清中羥自由基的含量。 8.計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示，應用SPSS11.5進行方差分析等處理。P<0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果： 1.AB組大鼠染菌4h，開始出現(xiàn)豎毛，精神萎靡、懶散，活動減少，呼吸稍促，食欲減退。此后上述癥狀進行

5、性加重，甚至大鼠出現(xiàn)呼吸急促、間斷震顫，毛色變暗，反應遲鈍等。檢測體溫可見，與正常組比較染菌大鼠大部分表現(xiàn)體溫降低(P<0.05)，同時血常規(guī)白細胞數(shù)有不同程度升高或降低。 2.AB組大鼠血培養(yǎng)結(jié)果部分呈陽性，4h組血平板上可見細菌生長，并進行生化鑒定，明確為鮑曼不動桿菌。 3.正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝竇清晰。匯管區(qū)小葉間動靜脈、小葉間膽管結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯炎細胞

6、。膿毒癥組可見肝細胞明顯腫脹，胞漿疏松，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，門靜脈淤血，匯管區(qū)有較多炎細胞浸潤。甚至可見肝竇間隙變窄，肝細胞脂肪變，點狀壞死及碎片狀壞死。但肝功能未見顯著變化。 4.膿毒癥組TNF-α濃度高于正常組，在4h達高峰后并無明顯下降。IL-18在膿毒癥各組與正常組之間均有差別(P<0.05)，其在膿毒癥組16h組達到高峰，明顯高于其余膿毒癥組(P<0.05)，之后濃度開始下降，甚至低于正常組(P<0.05)。各膿毒癥組IL

7、-18的濃度除24h與48h組間無明顯差異外，其余膿毒癥組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。抑制羥自由基能力檢測72小時組明顯低于其余組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各組無明顯差別。 結(jié)論： 1.通過腹腔注射鮑曼不動桿菌可以模擬感染因素來誘發(fā)SIRS及膿毒癥。 2.鮑曼不動桿菌膿毒癥時易侵犯肝臟，可能與細胞因子等有關(guān)。肝臟組織病理學上的損害早于肝功能的變化。建議臨床上針對膿毒癥患者可早期給予保肝治療