T-614治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機(jī)制研究.pdf

1、背景： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是最常見的自身免疫性疾病之一，致殘率高，常常影響患者生活質(zhì)量嚴(yán)重者甚至危及壽命。T-614是一種新型化學(xué)合成藥物，早期研究認(rèn)為T-614可能具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，目前尚無定論。新近的研究結(jié)果表明T-614并無選擇性COX-2抑制劑的特征但能顯著改善RA的病情以及多種實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。那么T-614是否通過其他途徑發(fā)揮療效？是否具有DMARD的特征？其作用機(jī)制如何？這些問題亟需更深入的研究和解答。

2、目的和意義： 探索T-614治療RA的作用機(jī)制，以明確其是否具有改善病情藥物(DMARD)或免疫調(diào)節(jié)藥物的特征。 方法： 建立大鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)模型，分別給予T-614、MTX、尼美舒利或T-614+MTX聯(lián)合治療，比較各組大鼠的發(fā)病情況；MR檢測(cè)關(guān)節(jié)軟組織和骨髓水腫情況；X線和microCT檢測(cè)骨質(zhì)破壞情況；Realtime PCR檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞和淋巴結(jié)細(xì)胞中IFN-γ、IL-4和IL-17的表達(dá)

3、水平；蛋白芯片(Bio-plex)檢測(cè)血清IL-1β、IL-6和TNF-α的含量；ELISA檢測(cè)血清抗-II型膠原抗體的含量。 建立RA成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)的體外培養(yǎng)體系，分別使用細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α和IL-17活化RA FLS，transwell侵襲試驗(yàn)研究T-614對(duì)活化后RA FLS侵襲能力的影響；H3-TdR檢測(cè)T-614對(duì)RA FLS增殖的影響；AnnexinV+PI染色檢測(cè)T-614對(duì)RA FLS凋亡

4、的影響；液相蛋白芯片(Bio-plex)和Realtime PCR分別檢測(cè)T-614對(duì)活化后RA FLS合成、表達(dá)MMPs、IL-6、IL-8和COX-2的影響。 活動(dòng)性RA患者隨機(jī)分為3組，0-4周的起始治療劑量分別為25mg/dT-614、50mg/d T-614和10mg/w MTX，5-24周時(shí)T-614的治療劑量均為50mg/d，MTX增為15mg/w。治療24周后分析比較三組患者的臨床療效(ACR20/50/70、D

5、AS28)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)；液相蛋白芯片檢測(cè)治療前后三組患者血清多種細(xì)胞因子的含量；Realtime PCR檢測(cè)三組患者外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞分化相關(guān)因子T-bet、GATA-3和ROR-γt的表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)體外研究T-614對(duì)RA患者外周血T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的影響。 結(jié)果： 與MTX相似，T-614對(duì)大鼠CIA的病情進(jìn)程有顯著的緩解作用，其關(guān)節(jié)炎評(píng)分、MR和X線評(píng)分均顯著減低；microC

6、T顯示T-614能顯著減少CIA骨質(zhì)破壞的程度；T-614能顯著減少CIA血清IL-6含量，減少淋巴結(jié)細(xì)胞中IFN-γ和IL-17的表達(dá)水平，并減少CIA體內(nèi)抗II型膠原抗體-特別是IgG2a型抗體的水平。 細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-17均能顯著增強(qiáng)RA FLS的侵襲能力和表達(dá)、合成MMP-1和MMP-3的能力，T-614在不影響RA FLS增殖的情況下，對(duì)活化后RA FLS的侵襲力均有不同程度的抑制效應(yīng)，該作用與抑

7、制MMP的表達(dá)和合成作用相關(guān)；T-614對(duì)COX-2誘導(dǎo)表達(dá)無顯著抑制效應(yīng)。 T-614治療后RA患者的臨床癥狀、體征均得到顯著改善，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)IgM和RF均顯著降低，與MTX組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；三組患者體內(nèi)IFN-γ和IL-6均不同程度的顯著減低；T-614治療組患者血清IL-8和IL-17水平亦顯著減低，而MTX組無此效應(yīng)；和治療前相比三組患者外周淋巴細(xì)胞中T-bet的表達(dá)水平均顯著增高，50mg/d T-614起始組和M

8、TX組外周血淋巴細(xì)胞中的GATA-3表達(dá)水平顯著增加，治療4周時(shí)50mg/d T-614起始組ROR-γt的表達(dá)水平顯著降低而24周時(shí)則無顯著差異；T-614對(duì)PMA誘導(dǎo)RA外周血T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的能力無顯著直接影響。 結(jié)論： T-614能顯著延緩CIA的發(fā)病進(jìn)程、減輕關(guān)節(jié)損傷和骨質(zhì)破壞程度，該病情緩解效應(yīng)與T-614減少細(xì)胞因子IL-6、IL-17和自身抗體的生成，調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能相關(guān)；T-6