腸粘膜屏障損傷在IgA腎病發(fā)病中的作用.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了闡述。
　　第一部分IgA腎病大鼠模型的構(gòu)建及鑒定。
　　目的:用口服免疫致IgA腎病大鼠模型，并觀察其腎臟病理變化，為之后IgA腎病發(fā)病機(jī)制的研究及探討IgA腎病的防治提供基礎(chǔ)。
　　方法:20只sprague dawley(SD)雌性大鼠隨機(jī)分成2組，即正常對(duì)照組和IgA腎病模型組(n=10)。利用牛血清白蛋白(BSA)+脂多糖(LPS)+四氯化碳(CCl4)聯(lián)合構(gòu)建IgA腎病大鼠模型。具體實(shí)

2、施方案如下:BSA（400 mg/kg，隔日灌胃）×6周+LPS（每只0.05 mg/次，第6、8周尾靜脈注射各1次）+CCl4（蓖麻油每只0.5ml/次+CCl4每只0.1ml/次，每周皮下注射1次）×9周。10周末處死動(dòng)物，用免疫熒光法檢測(cè)腎小球IgA的沉積，蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察各組大鼠腎臟的病理變化，動(dòng)物處死前1天收集24小時(shí)尿液做尿沉渣紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和24小時(shí)尿蛋白量的檢測(cè)。
　　結(jié)果:正常對(duì)照組大鼠腎臟未見IgA免

3、疫熒光;組織切片顯示，腎小體大小正常，系膜區(qū)無(wú)明顯增生，毛細(xì)血管袢開放良好，腎小管、腎間質(zhì)均未見明顯變化;尿液檢測(cè)未見鏡下血尿，24小時(shí)尿蛋白量正常。而IgA腎病模型組在腎小球系膜區(qū)可見亮綠色顆粒狀I(lǐng)gA沉積熒光;腎臟組織病理學(xué)顯示，腎小體增大，腎小囊擴(kuò)張，腎小球變小，腎小球血管稀疏，球內(nèi)系膜增生，纖維化明顯，腎小管腫脹阻塞;尿液檢測(cè)可見鏡下血尿，24小時(shí)尿蛋白量增加。
　　結(jié)論:利用BSA+ LPS+CCl4能成功構(gòu)建IgA腎病

4、大鼠模型。模型構(gòu)建的成功提示IgA腎病的發(fā)病可能與腸粘膜屏障功能破壞及粘膜免疫功能紊亂有關(guān)。
　　第二部分IgA腎病模型大鼠腸粘膜屏障損傷及其與IgA腎病發(fā)病的關(guān)系。
　　目的:觀察IgA腎病模型大鼠腸粘膜屏障的病理變化，并探討其與IgA腎病發(fā)病的關(guān)系。
　　方法:將14只SD雌性大鼠隨機(jī)分成2組，即正常對(duì)照組和IgA腎病模型組(n=7)。用HE染色觀察腸粘膜的一般組織病理變化，并用圖像分析系統(tǒng)測(cè)量?jī)山M大鼠腸絨毛高度、

5、腸隱窩深度及兩者比值、腸絨毛中央乳糜管體密度及其直徑;利用透射電鏡觀察兩組大鼠小腸上皮緊密連接的變化:激光共聚焦顯微鏡觀察小腸上皮緊密連接蛋白ZO-1和oceludin的表達(dá); RT-PCR和Westernblot技術(shù)測(cè)其mRNA和蛋白表達(dá)的變化;用高效液相色譜法測(cè)量尿中乳果糖/甘露醇的比值以反映腸粘膜通透性的變化;用免疫熒光法檢測(cè)腎小球IgA的沉積。
　　結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，IgA腎病模型鼠出現(xiàn)腸上皮脫落、腸絨毛變矮并不規(guī)整

6、，腸絨毛數(shù)量減少并間距增寬，固有層充血、乳糜管擴(kuò)張和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。圖像分析結(jié)果顯示，腸絨毛變短，腸隱窩加深，兩者比值減小，腸絨毛中央乳糜管體密度增大，直徑增大;腸上皮細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)受到破壞，電子密度降低;小腸上皮緊密連接蛋白ZO-I和occludin的mRNA及蛋白的表達(dá)均下降;尿中乳果糖/甘露醇的比值升高;腎小球系膜區(qū)有亮綠色顆粒狀I(lǐng)gA沉積;腎小球IgA的平均光密度與其尿乳果糖/甘露醇的比值呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:IgA腎病模

7、型組大鼠的腸粘膜屏障受損，腸粘膜通透性增加;腎小球IgA的相對(duì)表達(dá)量與腸粘膜的通透性呈正相關(guān)，提示腸粘膜屏障的受損與IgA腎病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。
　　第三部分大黃酸對(duì)IgA腎病大鼠腸粘膜屏障損傷的防治作用。
　　目的:觀察大黃酸(RH)對(duì)IgA腎病大鼠腸粘膜屏障損傷的防治作用。
　　方法:將28只SD雌性大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、IgA腎病模型組、RH治療組和RH預(yù)防組(n=7)。用HE染色和圖像分析系統(tǒng)測(cè)量各組大鼠

8、腸絨毛高度、腸隱窩深度、腸絨毛中央乳糜管體密度及其直徑;利用透射電鏡觀察各組大鼠小腸上皮緊密連接的變化;激光共聚焦顯微鏡觀察小腸上皮緊密連接蛋白ZO-1和occludin的表達(dá);RT-PCR和Western blot技術(shù)測(cè)其mRNA和蛋白表達(dá)的變化;用高效液相色譜法測(cè)量尿中乳果糖/甘露醇的比值來(lái)反映腸粘膜通透性的變化。
　　結(jié)果:正常對(duì)照組腸絨毛排列整齊，上皮細(xì)胞間的緊密連接位于細(xì)胞膜外側(cè)面的頂端，呈致密的條帶狀結(jié)構(gòu)，相鄰細(xì)胞之間

9、貼合緊密，無(wú)明顯縫隙，緊密連接蛋白ZO-1和occludin均勻一致的分布在小腸上皮細(xì)胞連接處的頂端。與正常對(duì)照組相比，IgA腎病模型組腸絨毛排列不規(guī)整，絨毛高度縮短，腸隱窩深度加深，兩者比值下降，中央乳糜管體密度和直徑均增加，腸上皮細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)受到破壞，電子密度降低、模糊，腸絨毛近腔面上皮細(xì)胞之間的ZO-1和occludin分布減少，不均，熒光強(qiáng)度變?nèi)?，其mRNA和蛋白的表達(dá)水平均降低，尿乳果糖/甘露醇的比值增高。與IgA腎

10、病模型組相比，RH預(yù)防組和RH治療組大鼠腸粘膜病理改變明顯減輕，腸絨毛高度增加，腸隱窩深度變淺，兩者比值升高，中央乳糜管體密度和直徑均下降，腸上皮緊密連接結(jié)構(gòu)修復(fù)，電子密度增高，細(xì)胞之間連接緊密，ZO-1和occludin的免疫熒光均增強(qiáng)，其mRNA和蛋白的表達(dá)水平也增高，尿乳果糖/甘露醇的比值降低。
　　結(jié)論: RH能促進(jìn)腸上皮的生長(zhǎng)，提高小腸上皮緊密連接蛋白ZO-1和occludin的表達(dá)，修復(fù)受損的緊密連接，保護(hù)腸粘膜和修復(fù)

11、腸粘膜損傷。
　　第四部分大黃酸對(duì)IgA腎病大鼠腎臟的防治作用。
　　目的:觀察實(shí)驗(yàn)性IgA腎病腎臟各種病理變化和大黃酸(RH)預(yù)防IgA腎病形成的效果及對(duì)IgA腎病的修復(fù)作用。
　　方法:28只SD雌性大鼠隨機(jī)分成4組，即正常對(duì)照組、IgA腎病模型組、RH治療組和RH預(yù)防組(n=7)。HE染色法觀察各組大鼠腎臟的病理變化，并用圖像分析系統(tǒng)測(cè)出各組動(dòng)物腎小體、腎小囊和腎小球的體密度、球囊比、腎小體的數(shù)密度、腎小體和腎小

12、球長(zhǎng)徑、近曲小管管腔和管壁的面積及其比值。免疫熒光法檢測(cè)腎小球IgA的沉積，并測(cè)量各組大鼠尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)及24小時(shí)尿蛋白量。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎臟纖維連接蛋白(FN)和平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(α-sMA)的表達(dá)。
　　結(jié)果:IgA腎病模型組和正常對(duì)照組相比，腎小體增大，腎小囊擴(kuò)張，腎小球變小，腎小球血管稀疏，球內(nèi)系膜增生，纖維化明顯，腎小管腫脹阻塞;圖像分析測(cè)量結(jié)果顯示，腎小體體密度增大，腎小囊體密度增大，腎小球體密度減小，球囊比減小

13、，腎小體長(zhǎng)徑增大，腎小球長(zhǎng)徑減小，近端腎小管管腔面積減小，管壁面積增大，腔壁比減小;腎小球系膜區(qū)出現(xiàn)IgA的沉積;尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)及24小時(shí)尿蛋白量增加;腎臟FN和α-SMA的表達(dá)增加。RH治療組和RH預(yù)防組與IgA腎病模型組相比，腎小體肥大減輕，系膜增生減少，腎小囊擴(kuò)張和近曲小管狹窄減輕;腎小球系膜區(qū)IgA的沉積減少，尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)及24小時(shí)尿蛋白量降低，腎臟FN和α-SMA的表達(dá)減少。
　　結(jié)論:BSA+LPS+CCl4建模的I