β-半乳糖凝集素-3和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物與Ⅱ期結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)直腸癌（Colorectal cancer,CRC）是消化道最常見的腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅著人類健康。目前廣泛采用AJCC/UICC的TNM分期是判斷CRC預(yù)后主要依據(jù)，但臨床病理分期不足以預(yù)測Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險。盡管Ⅱ期CRC處于疾病中早期，但預(yù)后差異很大，約20％的患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。研究Ⅱ期CRC患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的高危因素及相關(guān)分子標(biāo)記物可以補充分期系統(tǒng)的不足，并對基于腫瘤個體生物

2、學(xué)特征的治療提供理論依據(jù)。
　　β-半乳糖苷凝集素-3（galectin-3）被稱為腫瘤相關(guān)蛋白，參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長、凋亡、黏附、血管生成和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等過程，在CRC發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。我們既往研究得出通過使用galectin-3配體的競爭性抑制劑低分子柑橘果膠（Low-Molecular-Weight Citrus Pectin，LCP），封閉腫瘤細(xì)胞表面的galectin-3位點，在體內(nèi)、體外實驗中可以達(dá)到抗腫瘤及抑制

3、轉(zhuǎn)移的目的。galectin-3參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移可能與細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)之間粘附、血管生成等機制有關(guān)，但其在CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的具體作用尚不清楚，而且目前尚無關(guān)于galectin-3與Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)性的臨床研究。
　　腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移涉及多種機制，其中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的早期事件被受到廣泛關(guān)注。EMT發(fā)生時細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞間連接破壞

4、，細(xì)胞獲得遷移能力，促使腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。Wnt/β-catenin信號通路下游靶基因的激活可以引起EMT，而galectin-3在調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路中有重要作用，對于galectin-3與EMT在CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的作用及其之間的關(guān)系尚不清楚，galectin-3是否可以通過調(diào)節(jié) Wnt/β-catenin通路間接影響EMT還需進(jìn)一步證實。
　　本實驗旨在通過高通量方法研究影響Ⅱ期 CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的因素，探索g

5、alectin-3與EMT在Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的作用及其潛在臨床意義，進(jìn)一步闡明Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中的分子機制，以幫助篩選Ⅱ期CRC高危因素的患者，為尋找結(jié)直腸癌診斷治療新靶點提供理論依據(jù)，并指導(dǎo)臨床個體化治療。
　　目的：
　　分析galectin-3、E-cadherin、vimentin在Ⅱ期CRC組織中的表達(dá)情況、臨床意義及判斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的預(yù)測作用。探討影響Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的臨床病理因素。研究 ga

6、lectin-3與 E-cadherin、vimentin表達(dá)相關(guān)性，初步探索galectin-3與EMT在Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的關(guān)系。
　　方法：
　　按照實驗入組要求，收集2004年1月-2008年12月在廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院行根治術(shù)的Ⅱ期CRC患者腫瘤組織石蠟標(biāo)本129例制作組織芯片，另外選取8例2011年1月至2011年11月在廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院行結(jié)直腸癌根治術(shù)的Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織及配對正常組織石蠟標(biāo)本

7、作為對照。采用免疫組化技術(shù)檢測galectin-3、E-cadherin、vimentin的表達(dá)情況，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　各分子表達(dá)量與臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用卡方檢驗，理論頻數(shù)＜5者，進(jìn)行Fisher確切概率法；各分子表達(dá)量及臨床病理參數(shù)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用卡方檢驗，單因素分析有意義的變量進(jìn)一步采用多因素 Logistic回歸分析；galectin-3與E-cadherin、vimentin的

8、相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)系數(shù)分析；結(jié)直腸癌組織與其配對正常大腸組織之間的表達(dá)差異采用配對樣本的Wilcoxon符號秩檢驗；應(yīng)用Kaplan-Meier法進(jìn)行單變量生存分析，繪制生存曲線；各因素水平間比較用Log–rank分析；預(yù)后相關(guān)因素使用Cox回歸模型分析，單因素分析有意義的采用Backword:LR方式引入Cox多因素回歸模型分析；以α=0.05（雙側(cè)）為標(biāo)準(zhǔn)，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　

9、1、Galectin-3主要表達(dá)于細(xì)胞漿，表達(dá)率為81.2%，其表達(dá)量與腫瘤最大徑、分化程度、術(shù)前血清 CEA水平有關(guān)（P<0.05），腫瘤直徑越大、分化越差、術(shù)前CEA水平越高galectin-3表達(dá)量越高.。
　　2、E-cadherin在癌旁正常組織主要表達(dá)于細(xì)胞膜，在腫瘤組織中呈胞漿表達(dá)或漿、膜混合表達(dá)，腫瘤組織中其表達(dá)率為44.4%，其表達(dá)量與分化程度（P<0.05）有關(guān)，分化越好E-cadherin表達(dá)量越高。

10、　　3、Vimentin表達(dá)于細(xì)胞間質(zhì)，表達(dá)率為76.1%，其表達(dá)量與 T分期有關(guān)（P<0.05），vimentinT4分期表達(dá)量高于T3分期。
　　4、單因素卡方檢驗顯示復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與腫瘤部位、送檢淋巴結(jié)數(shù)目、T分期、術(shù)后是否輔助化療、術(shù)前血清CEA水平、galectin-3及vimentin表達(dá)量有關(guān)。多因素分析顯示復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與術(shù)前血清 CEA水平、送檢淋巴結(jié)數(shù)目、galectin-3表達(dá)量有關(guān)（P<0.05）。
　　5、Co

11、x單因素回歸模型分析得出預(yù)后與腫瘤部位、腫瘤最大直徑、送檢淋巴結(jié)數(shù)目、T分期、術(shù)前血清CEA水平，術(shù)后是否輔助化療、galectin-3及vimentin表達(dá)量有關(guān)。多因素分析顯示預(yù)后與術(shù)前血清CEA水平、T分期有關(guān)（P<0.05）。
　　6、腫瘤組織中 galectin-3與 E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.218，P=0.018），galectin-3與vimentin的表達(dá)不相關(guān)（r=0.172，P=0.06

12、4）。
　　7、Galectin-3及vimentin在腫瘤組織的表達(dá)量高于配對正常組織，E-cadherin在腫瘤組織的表達(dá)量低于配對正常組織。
　　結(jié)論：
　　1、在Ⅱ期CRC組織中g(shù)alectin-3表達(dá)上調(diào)與腫瘤最大徑、分化程度、術(shù)前血清CEA水平、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，并提示預(yù)后不良，galectin-3可能作為Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物。
　　2、細(xì)胞間質(zhì)中vimentin表達(dá)上調(diào)對Ⅱ期CRC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)