枳椇子提取物工藝研究及對低壓缺氧環(huán)境下小鼠運動能力的影響.pdf

1、本課題組的研究課題是高原耐缺氧藥物枳棋片的研究。前期的研究證實了枳棋子水提取物常壓下提高運動能力、耐缺氧以及耐寒耐熱的活性，且提取物浸膏可以以片劑的形式制片。作者主要負責對水提取工藝和醇沉、萃取等精制工藝進行優(yōu)化，并且對枳棋子提取物在高原環(huán)境下提高運動能力的活性進行考察，對藥物可能的作用機制進行初步探索。
　　 本實驗采用高效液相色譜法(HPLC)對枳棋子提取物進行定性和定量分析。通過對照品相對保留時間(RRT)對比的方法，對枳

2、棋子中含量較豐富的黃酮類化合物進行鑒定，并對其中含量較多的化合物B進行富集、純化及波譜分析。以提取物中三個主要黃酮類化合物含量為指標，采用兩因素三水平析因設計對枳棋子水提取的料液比和提取時間兩個因素進行優(yōu)化，采用單因素平行實驗法對水提取次數(shù)、醇沉時酒精濃度以及醇沉的時間進行優(yōu)選。在乙酸乙酯萃取工藝中，乙酸乙酯按枳棋子水體醇沉物(EEE)水溶液體積比1:1，進行多次萃取，比較各次萃取所得三個主要黃酮類化合物的含量。在藥效學試驗中，將ICR

3、小鼠隨機分為空白對照組、模型組、諾迪康陽性對照組(280mg/kg.d)、枳椇子提取物1(200、100、50mg/kg.d)和枳棋子提取物2(32、16、8mg/kg.d)高、中、低劑量組，通過模擬高原缺氧環(huán)境下小鼠游泳模型，考察高原缺氧環(huán)境下藥物對小鼠運動能力的影響，為藥物耐高原缺氧和高原環(huán)境下提高運動能力提供直接證據(jù)。考察枳椇子提取物1和2對模擬高原環(huán)境下游泳后小鼠的血清尿素氮(UN)濃度、血清總抗氧化能力(T-AOC)活性、肝臟

4、丙二醛(MDA)濃度、肝臟過氧化氫酶(CAT)活性、肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的干預，對其藥效活性機制進行初步探索。
　　 高效液相色譜圖中提取物溶液主要色譜峰與對照品色譜峰中二氫楊梅素、二氫槲皮素、楊梅素和槲皮素相對應，相對保留時間一致，對富集得到的化合物B進行了質譜和核磁共振氫譜分析，鑒定為枳棋素Ⅲ。工藝試驗結果顯示，料液比和提取時間兩個因素對水提取的結果的影響均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，兩因素具有交互

5、作用(P<0.05)，且料液比1:12，提取時間0.5小時，為最優(yōu)組合，提取3次后黃酮的總轉移率達到50.7％，且第三次提取的黃酮量為三次總和的8.28％，所以提取三次較為合適。2、3和4倍體積量的95％乙醇醇沉后，總黃酮轉移率之間的差異沒有統(tǒng)計學意義，浸膏得率為2倍體積醇沉最高，差異與另兩組相比具有統(tǒng)計學意義。醇沉8小時、10小時和12小時對黃酮轉移率和浸膏得率的差異均沒有體現(xiàn)統(tǒng)計學意義。在乙酸乙酯萃取工藝中，萃取4次后，單次萃取所得

6、黃酮含量不足萃取總的黃酮含量的5％。
　　 模擬高原缺氧環(huán)境下小鼠游泳實驗顯示，枳椇子提取物1高、中劑量組和提取物2高劑量組較模型組小鼠游泳時間延長，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提取物1高劑量組和提取物2高、中劑量組較模型組血清尿素氮濃度降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提取物1、2高、中劑量組較模型組肝臟丙二醛濃度降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提取物1各劑量組、提取物2高劑量組較模型組肝臟過氧化物酶

7、活性升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提取物1各劑量組、提取物2高、中劑量組較模型組谷胱甘肽過氧化物酶活性升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型組血清總抗氧化能力較空白組升高，提取物1和提取物2高劑量組較模型組數(shù)值降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 實驗結果顯示：水提工藝中，可以確定料液比1:12、提取次數(shù)3次、提取時間0.5小時為提取條件，醇沉時選擇2倍體積量的乙醇浸膏得率最高，且符合節(jié)約的原則，