枳椇子提取物工藝研究及對(duì)低壓缺氧環(huán)境下小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響.pdf

1、本課題組的研究課題是高原耐缺氧藥物枳棋片的研究。前期的研究證實(shí)了枳棋子水提取物常壓下提高運(yùn)動(dòng)能力、耐缺氧以及耐寒耐熱的活性，且提取物浸膏可以以片劑的形式制片。作者主要負(fù)責(zé)對(duì)水提取工藝和醇沉、萃取等精制工藝進(jìn)行優(yōu)化，并且對(duì)枳棋子提取物在高原環(huán)境下提高運(yùn)動(dòng)能力的活性進(jìn)行考察，對(duì)藥物可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)枳棋子提取物進(jìn)行定性和定量分析。通過(guò)對(duì)照品相對(duì)保留時(shí)間(RRT)對(duì)比的方法，對(duì)枳

2、棋子中含量較豐富的黃酮類化合物進(jìn)行鑒定，并對(duì)其中含量較多的化合物B進(jìn)行富集、純化及波譜分析。以提取物中三個(gè)主要黃酮類化合物含量為指標(biāo)，采用兩因素三水平析因設(shè)計(jì)對(duì)枳棋子水提取的料液比和提取時(shí)間兩個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，采用單因素平行實(shí)驗(yàn)法對(duì)水提取次數(shù)、醇沉?xí)r酒精濃度以及醇沉的時(shí)間進(jìn)行優(yōu)選。在乙酸乙酯萃取工藝中，乙酸乙酯按枳棋子水體醇沉物(EEE)水溶液體積比1:1，進(jìn)行多次萃取，比較各次萃取所得三個(gè)主要黃酮類化合物的含量。在藥效學(xué)試驗(yàn)中，將ICR

3、小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、諾迪康陽(yáng)性對(duì)照組(280mg/kg.d)、枳椇子提取物1(200、100、50mg/kg.d)和枳棋子提取物2(32、16、8mg/kg.d)高、中、低劑量組，通過(guò)模擬高原缺氧環(huán)境下小鼠游泳模型，考察高原缺氧環(huán)境下藥物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響，為藥物耐高原缺氧和高原環(huán)境下提高運(yùn)動(dòng)能力提供直接證據(jù)?？疾扈讞鹤犹崛∥?和2對(duì)模擬高原環(huán)境下游泳后小鼠的血清尿素氮(UN)濃度、血清總抗氧化能力(T-AOC)活性、肝臟

4、丙二醛(MDA)濃度、肝臟過(guò)氧化氫酶(CAT)活性、肝臟谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性的干預(yù)，對(duì)其藥效活性機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　 高效液相色譜圖中提取物溶液主要色譜峰與對(duì)照品色譜峰中二氫楊梅素、二氫槲皮素、楊梅素和槲皮素相對(duì)應(yīng)，相對(duì)保留時(shí)間一致，對(duì)富集得到的化合物B進(jìn)行了質(zhì)譜和核磁共振氫譜分析，鑒定為枳棋素Ⅲ。工藝試驗(yàn)結(jié)果顯示，料液比和提取時(shí)間兩個(gè)因素對(duì)水提取的結(jié)果的影響均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩因素具有交互

5、作用(P<0.05)，且料液比1:12，提取時(shí)間0.5小時(shí)，為最優(yōu)組合，提取3次后黃酮的總轉(zhuǎn)移率達(dá)到50.7％，且第三次提取的黃酮量為三次總和的8.28％，所以提取三次較為合適。2、3和4倍體積量的95％乙醇醇沉后，總黃酮轉(zhuǎn)移率之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，浸膏得率為2倍體積醇沉最高，差異與另兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。醇沉8小時(shí)、10小時(shí)和12小時(shí)對(duì)黃酮轉(zhuǎn)移率和浸膏得率的差異均沒(méi)有體現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在乙酸乙酯萃取工藝中，萃取4次后，單次萃取所得

6、黃酮含量不足萃取總的黃酮含量的5％。
　　 模擬高原缺氧環(huán)境下小鼠游泳實(shí)驗(yàn)顯示，枳椇子提取物1高、中劑量組和提取物2高劑量組較模型組小鼠游泳時(shí)間延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提取物1高劑量組和提取物2高、中劑量組較模型組血清尿素氮濃度降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提取物1、2高、中劑量組較模型組肝臟丙二醛濃度降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提取物1各劑量組、提取物2高劑量組較模型組肝臟過(guò)氧化物酶

7、活性升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提取物1各劑量組、提取物2高、中劑量組較模型組谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組血清總抗氧化能力較空白組升高，提取物1和提取物2高劑量組較模型組數(shù)值降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：水提工藝中，可以確定料液比1:12、提取次數(shù)3次、提取時(shí)間0.5小時(shí)為提取條件，醇沉?xí)r選擇2倍體積量的乙醇浸膏得率最高，且符合節(jié)約的原則，