不同證候食管癌自身抗原鑒定.pdf

1、　　目的
　　本項(xiàng)目用不同證型食管癌患者血清、手術(shù)切除癌組織標(biāo)本以及正常血清為研究對(duì)象,運(yùn)用病人自身血清篩選自身抗原,從中醫(yī)各證型食管癌患者癌組織中鑒定、分析和比較出食管癌癌變階段自身抗原,為食管癌中醫(yī)證候分子病機(jī)的闡明及診斷和治療提供可靠依據(jù)。
　　方法
　　按照中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)收集痰氣交阻型、瘀血內(nèi)結(jié)型、津虧熱結(jié)型和氣虛陽(yáng)微型四種中醫(yī)證型食管癌患者組織樣品,運(yùn)用一維電泳分離患者癌組織蛋白,用患者血清和正常血清為一

2、抗進(jìn)行Western blot反應(yīng),找出特異條帶,再運(yùn)用二維凝膠電泳分離患者癌組織蛋白,制備三套凝膠,兩套分別用患者血清和正常血清為一抗進(jìn)行免疫印跡反應(yīng),二者免疫印跡點(diǎn)比對(duì),找出患者組特異顯色點(diǎn),一套用硝酸銀染色,挖取染色凝膠上特異顯色點(diǎn)對(duì)應(yīng)的蛋白點(diǎn),將挖取的蛋白樣品用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析,所得結(jié)果在 NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)中搜索,獲得蛋白的

3、名稱及功能,對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果
　　1.進(jìn)一步改進(jìn)SERPA技術(shù),四個(gè)證型共獲得一維電泳患者血清為一抗免疫印跡圖像4張、二維電泳分別用患者和正常血清為一抗免疫印跡圖像 8張、膠用硝酸銀染色圖像8張,為特異蛋白的鑒定奠定基礎(chǔ)。
　　2.每個(gè)證型4幅圖片進(jìn)行對(duì)比,共獲得8個(gè)特異蛋白點(diǎn),其中痰氣交阻證 1個(gè),編號(hào)為1號(hào)；瘀血內(nèi)結(jié)證3個(gè),編號(hào)為2號(hào)、2上、2下；津虧熱結(jié)證3個(gè),編號(hào)為3號(hào)、3左、3右；氣虛陽(yáng)微

4、證1個(gè),編號(hào)為4號(hào)。
　　3.經(jīng)質(zhì)譜分析得到7種特異表達(dá)蛋白質(zhì),1號(hào)為keratin, type I cytoskeletal 13；2號(hào)為caldesmon；2上為tumor rejection antigen (gp96) 1 variant、2下為heat shock protein gp96 precursor；3號(hào)為 actin, gamma 2, smooth muscle, enteric, isoform CRA

5、_a；3左、3右均為Keratin 13；4號(hào)為Keratin, type I cytoskeletal 16,所有蛋白質(zhì)鑒定得分均大于 63分,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　1.改進(jìn)了SERPA技術(shù)。
　　2.本課題得到7種蛋白質(zhì),其中 caldesmon； tumor rejection antigen (gp96) 1 variant ；heat shock protein gp96 precursor；a