細(xì)菌感染小鼠肺炎模型及溶葡球菌酶治療小鼠肺炎的藥效學(xué)評價(jià)研究.pdf

1、細(xì)菌性肺炎(bacterialpneumonia)占醫(yī)院各類病原體肺炎的80％。而在過去的半個世紀(jì)中,大量廣譜或超廣譜抗菌素投入臨床并未使肺炎的死亡率下降,反而使得細(xì)菌的耐藥率不斷增高。有報(bào)告顯示住院死亡病人約15%與肺炎有關(guān)。社區(qū)獲得性肺炎(CAP)死亡率為5%-10%,而醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)的病死率則高達(dá)20%-50%。
　　細(xì)菌性肺炎是感染性肺炎中較常見的類型,如果沒有及時有效的治療,嚴(yán)重細(xì)菌感染可以導(dǎo)致高死亡率?？股?/p>

2、是治療細(xì)菌感染性疾病最有效的武器,然而隨著抗生素的濫用,細(xì)菌的耐藥性問題日益加劇,抗生素的殺菌作用受到嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)、廣譜耐藥嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia,SMA)、耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)和耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(VRSA)等多重耐藥菌是醫(yī)院獲得性感染的主要致病菌,其超

3、強(qiáng)耐藥性往往導(dǎo)致感染者不治身亡。
　　本研究利用臨床分離鑒定的嗜麥芽窄食單胞菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌建立了細(xì)菌感染小鼠肺部模型。在感染前注射免疫抑制劑地塞米松、環(huán)磷酰胺,造成小鼠自身的免疫抑制,以滴鼻的方式滴入新鮮菌液,時相性監(jiān)測細(xì)菌感染后小鼠的臨床癥狀、體重、體溫、肺重、血細(xì)胞與組織病理學(xué)變化。結(jié)果顯示,感染肺炎的模型組動物精神萎靡,活動較少,體溫迅速降低,體重下降明顯,肺重增加,免疫細(xì)胞(WBC、GRAN、LYM、MONO

4、)處在極低水平,小鼠死亡率較高,肺部病理切片觀察結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)結(jié)束小鼠肺組織結(jié)構(gòu)明顯異常,肺間質(zhì)血管周圍水腫、出血和壞死,肺泡腔炎性細(xì)胞浸潤,肺組織存在明顯的細(xì)菌集團(tuán)。
　　為了獲得重組溶葡球菌酶,構(gòu)建了pQE30重組質(zhì)粒載體,誘導(dǎo)表達(dá)后得到了目的蛋白,并且證明在體外有殺金黃色葡萄球菌的活性。同時以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染小鼠肺炎模型評價(jià)重組溶葡球菌酶治療效果,通過對小鼠體重、體溫、肺重、脾重、血細(xì)胞與組織病理學(xué)變化的時相性監(jiān)

5、測,評價(jià)重組溶葡球菌酶的療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,重組溶葡球菌酶可以減少肺炎小鼠體重、肺重的降低和脾重增加,促進(jìn)動物體溫和免疫細(xì)胞(WBC、GRAN、LYM、MONO)數(shù)量的恢復(fù),并且減少小鼠死亡例數(shù),延長死亡小鼠的生存時間、死亡中位時間,生存曲線右移,保護(hù)了動物在感染后期免于死亡。實(shí)驗(yàn)表明,重組溶葡球菌酶對臨床分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染小鼠肺炎的治療效果優(yōu)于臨床常用抗生素萬古霉素,在感染肺炎后4小時,給予高劑量的重組溶葡球菌酶的療效