丹酚酸A、C分子藥對配伍對腎纖維化過程中凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：應(yīng)用丹酚酸 A、C分子藥對配伍，建立分子藥對配伍的新模式，研究其對腎纖維化過程中凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：將50只雄性SD大鼠通過隨機分組法分成5組，每組10只：正常組、模型組、丹酚酸A組、丹酚酸C組、丹酚酸A+C組（即1：1配伍組）。正常組以外40只大鼠，需建立單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型。模型建立后第2天開始，各組大鼠采用相應(yīng)干預(yù)措施治療14天。末次治療后收集24h尿液，并于24h后采集相應(yīng)的血液和腎臟標本，測

2、定血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）及尿β2-微球蛋白（β2-MG）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的含量，觀察腎組織病理及膠原沉積，免疫組化法檢測腎組織內(nèi)纖維粘連蛋白（FN）、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）的變化，TUNEL法檢測腎小管間質(zhì)細胞凋亡情況，實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術(shù)檢測腎組織半胱氨酸天冬門氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP78）和重組人趨化因子配體5（CC

3、L5）、趨化因子配體10（CXCL10） mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠血Cr、BUN水平模型組血Cr以及BUN水平較正常組均顯著增高。丹酚酸A、C組血Cr水平較模型組，顯著降低；各治療組血BUN水平，較之模型組雖有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各治療組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.各組大鼠HE染色及病理評分 UUO大鼠模側(cè)腎臟小管結(jié)構(gòu)破壞，炎性細胞于管腔及間質(zhì)內(nèi)彌漫性浸潤，腎組織呈明顯間質(zhì)纖維化

4、改變，而正常組大鼠無明顯組織病理變化；各治療組HE評分，較模型組顯著下降，且丹酚酸A、A+C組HE評分較丹酚酸C組下降更明顯。
　　3.各組大鼠Masson染色及病理評分 UUO組大鼠腎小管上皮、間質(zhì)內(nèi)及系膜區(qū)，淡藍色膠原大量沉積，正常組腎組織則無明顯改變；較之模型組，各治療組Masson評分顯著下降，且以丹酚酸A+C分子藥對配伍組效果更好。
　　4.各組大鼠尿β2-MG、NAG水平 UUO模型組尿β2-MG以及NAG水平較

5、正常組，顯著上升。各治療組尿β2-MG水平顯著低于模型組，丹酚酸A、C組尿NAG水平顯著低于模型組。各治療組間尿β2-MG水平相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；丹酚酸A+C組尿NAG水平顯著高于丹酚酸C組，余各治療組尿NAG水平相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.各組大鼠FN、NOX4檢測模型組FN和NOX4表達與正常組相比，均顯著升高。各治療組FN和NOX4表達與模型組比較，均顯著下降。各治療組比較，丹酚酸A+C組FN和NOX4表達丹酚酸A

6、組及丹酚酸C組顯著下降；丹酚酸A組FN表達較丹酚酸C組顯著下降。
　　6.各組大鼠 TUNEL檢測與正常組比較，模型組細胞凋亡指數(shù)顯著升高。與模型組比較，各治療組均可顯著降低UUO大鼠細胞凋亡指數(shù)，且丹酚酸A、A+C組細胞凋亡指數(shù)較丹酚酸C組顯著下降，丹酚酸A+C組細胞凋亡指數(shù)較丹酚酸A組顯著下降。
　　7.各組大鼠RT-PCR檢測模型組Caspase-3mRNA、GRP78mRNA和CCL5mRNA、CXCL10mRNA相

7、對表達較正常組顯著升高。與模型組相比，各治療組Caspase-3mRNA、GRP78mRNA和CCL5mRNA、CXCL10mRNA相對表達顯著下降。各治療組比較，丹酚酸A、A+C組Caspase-3mRNA和CCL5mRNA、CXCL10mRNA相對表達較丹酚酸C組顯著下降；A+C分子藥對配伍組CCL5mRNA相對表達較丹酚酸A組顯著下降，且GRP78mRNA相對表達較丹酚酸A、C組顯著下降。
　　結(jié)論：丹酚酸 A、C及其分子藥