丹酚酸A、B及其分子藥對配伍對腎纖維化過程中PDGF-C-PDGFR-α信號途徑的干預(yù)作用.pdf

1、目的:觀察丹酚酸A、B及其分子藥對配伍對腎纖維化中PDGF-C/PDGFR-α信號通路的干預(yù)作用,建立分子藥對配伍的新模式,為應(yīng)用中醫(yī)理論研究中藥分子藥對走向臨床提供新的思路。
　　方法:50只雄性SPF級SD大鼠隨機分為五組:正常組(n=10)、造模組(n=40)。造模組采用單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)建立腎間質(zhì)纖維化模型,造模后分為模型組(n=10),丹酚酸A組(n=10),丹酚酸B組(n=10),丹酚酸A、B按1:1配伍組(簡稱

2、丹酚酸A+B組,n=10)。于造模后第2天開始,各組給予相應(yīng)的干預(yù)措施治療14天,實驗結(jié)束前1天收集24小時尿液,治療期滿后麻醉大鼠,腹主動脈采血,摘取右側(cè)腎組織并沿縱軸剖開,一半用4％的多聚甲醛固定,一半放置液氮保存。檢測大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿NAG蛋白、β2微球蛋白(β2-MG),觀察腎組織病理改變及膠原沉積,并應(yīng)用免疫熒光觀察大鼠腎組織CTGF、Par-3蛋白表達情況,Western Blot方法檢測大鼠腎組織

3、PDGFC、PDGFR-α蛋白的表達變化,RT-PCR法檢測大鼠腎組織PDGFC、PDGFR-αmRNA表達變化。
　　結(jié)果:1.HE染色結(jié)果正常組大鼠腎組織未見病理改變,UUO組大鼠腎組織可見腎小管上皮細胞大量萎縮空泡變性,管腔擴張或斷裂,并可見腎間質(zhì)內(nèi)大量炎性細胞浸潤,間質(zhì)纖維化較明顯;各治療組病理變化較模型組均有明顯改善,丹酚酸B、A+B組HE評分均顯著低于丹酚酸A劑量組(P<0.05)。
　　2.Masson染色結(jié)果

4、正常組大鼠腎組織膠原沉積不明顯,模型組可見腎小囊、腎小管基膜及間質(zhì)出現(xiàn)明顯的絲狀淡藍色膠原沉積,各治療組大鼠腎組織膠原沉積較模型組均明顯減輕。各治療組間比較,丹酚酸A+B劑量組Masson評分顯著低于丹酚酸A劑量組(P<0.05)。
　　3.腎功能測定結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠血清Cr,BUN水平均顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,丹酚酸A組可明顯降低大鼠血清Cr水平(P<0.05),余治療組大鼠血清Cr水平有下降趨勢,但

5、差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);較之模型組,丹酚酸A組和丹酚酸B組可明顯降低大鼠血清BUN水平(P<0.05),余治療組大鼠血清BUN水平有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);各治療組間比較,大鼠血清Cr和BUN水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.尿β2微球蛋白檢測結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠尿?2-MG水平顯著升高(P<0.05),與模型組比較,各治療組大鼠尿?2-MG水平顯著降低(P<0.05),各治療

6、組間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.尿NAG蛋白檢測結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠尿NAG蛋白水平顯著升高(P<0.05),與模型組比較,各治療組大鼠尿NAG水平顯著降低(P<0.05),各治療組間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　6.CTGF免疫熒光檢測結(jié)果 CTGF陽性表達信號呈綠色,表達部位主要定位于UUO大鼠腎組織腎小管上皮細胞。正常組大鼠腎組織腎小管上皮細胞多呈陰性,熒光強度較弱(±);

7、模型組大鼠腎組織腎小管上皮細胞陽性細胞數(shù)目比正常組明顯增多,熒光強度明顯增強(+++);經(jīng)丹酚酸A、B及組分配伍治療后,CTGF熒光強度較模型組明顯減弱,其中以丹酚酸A+B組減弱較為明顯(±),丹酚酸B組次之(+),丹酚酸A組較模型組熒光略有減弱(++)。
　　7.Par-3免疫熒光檢測結(jié)果 Par-3陽性表達信號呈綠色,表達部位主要定位于大鼠腎組織腎小管上皮細胞胞質(zhì)。正常組大鼠腎組織腎小管上皮細胞多呈陽性,熒光強度較強(+++)

8、;模型組大鼠腎組織腎小管上皮細胞陽性細胞數(shù)目比正常組明顯減少,熒光強度明顯減弱(±);經(jīng)丹酚酸A、B及組分配伍治療后,丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸A+B組Par-3熒光強度較模型組明顯增強,其中以丹酚酸A+B組增強較為明顯(+++),丹酚酸B組次之(++),丹酚酸A組熒光略有增強(+)。8.RT-PCR檢測結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠腎組織 PDGF-CmRNA和PDGFR-αmRNA相對表達顯著升高(P<0.05);較之模型組,各治療組

9、大鼠腎組織PDGF-CmRNA和PDGFR-αmRNA相對表達顯著降低(P<0.05),各治療組間比較,丹酚酸A+B組能顯著降低大鼠腎組織PDGF-CmRNA相對表達,其效果優(yōu)于丹酚酸A組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),丹酚酸 A+B組能顯著降低大鼠腎組織PDGFR-αmRNA相對表達,其效果優(yōu)于丹酚酸A組和丹酚酸B組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　9. Western blot檢測結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠腎

10、組織PDGF-C和PDGFR-α蛋白相對表達顯著升高(P<0.05);與模型組比較,各治療組大鼠腎組織 PDGF-C和PDGFR-α蛋白相對表達顯著降低(P<0.05),各治療組間比較,丹酚酸A+B組大鼠腎組織PDGF-C蛋白相對表達顯著低于丹酚酸A組和丹酚酸B組(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.丹酚酸B和組分配伍組能顯著改善大鼠腎組織病理改變,其效果優(yōu)于丹酚酸A組;組分配伍組能顯著減輕大鼠腎組織膠原沉積,其效果優(yōu)于丹酚酸A組;組

11、分配伍組能顯著抑制大鼠腎組織CTGF的表達,促進大鼠腎組織Par-3的表達,其效果優(yōu)于丹酚酸A和B組;組分配伍組能顯著降低大鼠腎組織PDGF-CmRNA的相對表達,其效果優(yōu)于丹酚酸A組;組分配伍組能顯著降低大鼠腎組織PDGFR-αmRNA和PDGF-C蛋白的相對表達,其效果優(yōu)于丹酚酸A和B組;而丹酚酸A、B及其分子藥對配伍在改善大鼠腎功能和腎小管功能方面無顯著差異。
　　2.丹酚酸A、B及其分子藥對配伍能一定程度改善UUO大鼠腎功