丹酚酸B對肝纖維化抑制作用的實驗研究.pdf

1、背景與目的：肝纖維化是肝臟對各種慢性肝損傷的修復(fù)反應(yīng)，主要表現(xiàn)為肝細胞外基質(zhì)合成和降解失衡，導(dǎo)致過多細胞外基質(zhì)沉積。纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)是細胞外基質(zhì)的重要組成部分。研究表明，肝纖維化早期FN含量即增加。肝星狀細胞(HSC)是肝纖維化病理改變的關(guān)鍵，本研究旨在通過二甲基亞硝胺(DMN)肝纖維化模型，觀察FN及其受體在肝纖維化形成過程中的變化，探討丹酚酸B(SA-B)對肝纖維化的抑制作用。 方法： 1

2、、體內(nèi)實驗：Wistar雄性大鼠30只，隨機分為正常組，模型組及SA-B用藥組，普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。模型組和SA-B組以DMN10μg·kg-1，2天一次腹腔注射，連續(xù)4周，共14次誘導(dǎo)大鼠肝纖維化。SA-B在造模開始時以10mg/kg灌胃，正常組和模型組灌等量生理鹽水，持續(xù)4周，于造模4周末處死全部大鼠。HE染色觀察大鼠肝臟炎癥的病理改變；鹽酸水解法測定肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量，免疫組化及Western blot法分析α平滑肌

3、肌動蛋白(α-SMA)、整合素α5β1及FN的表達。明膠酶圖法測定肝組織MMP-2、MMP-9活性。2、體外實驗：復(fù)蘇HSC-T6細胞株，以10％胎牛血清/DMEM傳代培養(yǎng)，分為正常組和FN包被組，并分4h、8h、12h、24h、36h等觀察點。選擇傳一代HSC-T6進行藥效實驗，分為4組：正常組、模型組、SA-B組(終濃度分別為10-6mol/L、10-5mol/L)。模型組及SA-B組均以FN包被，正常組和模型組加0.5％胎牛血清(