以碳酸酐酶Ⅱ與水通道蛋白1、4表達(dá)詮釋“氣津”于“肺病及腸”病理傳變中的意義.pdf

1、“肺與大腸相表里”是中醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論之一,首見于《內(nèi)經(jīng)》，《靈樞·本輸篇》曰：“肺合大腸，大腸者，傳導(dǎo)之腑”。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，“肺與大腸”通過經(jīng)脈絡(luò)屬構(gòu)成表里相合關(guān)系，如《靈樞·經(jīng)脈篇》中記載：“肺手太陰之脈，起于中焦，下絡(luò)大腸……”，“大腸手陽明之脈，……絡(luò)肺下膈，屬大腸”?！胺闻c大腸”生理上相互依存、病理上相互影響。鑒于“肺與大腸”的相關(guān)性，臨床上治療二者病變時(shí)，除直接治療肺或大腸本臟本腑病變之外，還可根據(jù)二者表里相合理論，或肺病治腸，或

2、腸病治肺，或肺腸同治，或虛實(shí)補(bǔ)瀉。為更好的認(rèn)識(shí)這一理論，對(duì)其現(xiàn)代機(jī)理的認(rèn)識(shí)也日趨深入，取得的成果層出不窮，主要體現(xiàn)在以下幾方面：胚胎源、公共粘膜免疫、氣體排泄途徑、內(nèi)分泌物質(zhì)、神經(jīng)系統(tǒng)、腸源性內(nèi)毒素和神經(jīng)-內(nèi)分泌-網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)等相關(guān)。
　　鑒于此理論在中醫(yī)學(xué)中的重要性，揭示其現(xiàn)代生物學(xué)機(jī)制以更好的指導(dǎo)臨床遣方用藥具有重要意義；同時(shí)亦為促進(jìn)中醫(yī)現(xiàn)代化和國際化提供一定依據(jù)。
　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，“肺與大腸”生理上相互聯(lián)系，主要體現(xiàn)為肺氣

3、肅降與大腸傳導(dǎo)之間的相互依存；病理上相互傳變，主要體現(xiàn)在氣機(jī)下達(dá)不及和易為燥邪所傷，即“氣”與“津”兩方面，遂以此為切入點(diǎn)以初步探討“肺病及腸”部分病理傳變規(guī)律。
　　材料與方法：1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)SD大鼠40只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組（對(duì)照組）和慢性支氣管炎模型組（模型組），每組各20只。2.模型制備：采用改良煙熏法復(fù)制慢性支氣管炎即（肺?。┐笫竽Ｐ汀?.實(shí)驗(yàn)方法：應(yīng)用HE染色觀察大鼠肺與近端結(jié)腸組織病理變化；運(yùn)用干濕重比

4、觀測(cè)兩組大鼠糞水含量變化；利用硝酸還原酶法觀察血漿中一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量變化；運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELASA）觀測(cè)血漿、支氣管肺泡灌洗液(Bronchus-associated lymphoid tissue, BALF)及肺與近端結(jié)腸組織勻漿中碳酸酐酶（Carbonic anhydrase）、血管活性腸肽（Vasoactive intes

5、tinal peptide,VIP）、P物質(zhì)（substance P, SP）含量變化；采用免疫組化染色及Western-blot等檢測(cè)方法觀察肺與近端結(jié)腸組織中水通道蛋白1、4(Aquaporin1/4，AQP1/4)和碳酸酐酶Ⅱ（Carbonic anhydraseⅡ，CAⅡ）的表達(dá)變化。力圖通過以上研究初步探討“肺津與腸津”、“肺氣與腸津”相關(guān)性；探討“肺與大腸”血循環(huán)關(guān)系，以初步揭示“肺病及腸”部分病理傳變規(guī)律及機(jī)制。
　

6、　結(jié)果：1.一般情況：對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)佳，毛色光澤，排便正常；模型組大鼠精神狀態(tài)欠佳，毛色枯黃，排軟便、糞便呈褐色偏黑，且出現(xiàn)咳嗽癥狀。2.病理結(jié)果：對(duì)照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁無增厚和破壞；氣道粘膜上皮完整無損壞，纖毛無粘連脫落；氣道管腔規(guī)整、管壁無增厚，未見炎細(xì)胞浸潤。模型組大鼠肺泡壁結(jié)構(gòu)紊亂、增厚，有淋巴細(xì)胞浸潤和吞噬色素沉著。兩組大鼠近端結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞完整，腺體結(jié)構(gòu)與杯狀細(xì)胞正常，但模型組大鼠近端結(jié)腸組織發(fā)現(xiàn)有炎細(xì)胞浸潤。

7、3.糞水含量：與對(duì)照組相比，模型組大鼠糞水含量顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。4.NO含量：兩組相比，模型組大鼠血漿中NO含量顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。5.VIP含量：兩組相比，血漿、BALF及肺與近端結(jié)腸組織勻漿中VIP含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。6.SP含量：兩組相比，血漿、BALF及肺與近端結(jié)腸組織勻漿中SP含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。7.CA含量：與對(duì)照組相比，模型組大鼠BALF中CA含量顯著降

8、低（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而血漿及肺與近端結(jié)腸組織勻漿中CA含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。8.肺組織 AQP1表達(dá)：免疫組化染色顯示 AQP1表達(dá)于肺組織微血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡壁上皮細(xì)胞。半定量免疫印跡分析提示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠肺組織AQP1表達(dá)顯著下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。9.肺與近端結(jié)腸組織AQP4表達(dá)：免疫組化染色顯示氣道粘膜上皮細(xì)胞基底側(cè)有 AQP4表達(dá)，兩組平均光密度分析顯示模型組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、差異（P<0.05）。免疫組化染色發(fā)現(xiàn)AQP4表達(dá)于近端結(jié)腸粘膜頂部吸收細(xì)胞，以基底側(cè)和腔面為主。兩組平均光密度分析，模型組顯著降低，（P<0.05）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。10.肺與近端結(jié)腸組織 CAⅡ表達(dá)：免疫組化染色顯示 CAⅡ表達(dá)于肺泡壁上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。半定量免疫印跡分析提示，與對(duì)照組相比，模型組表達(dá)顯著降低，（P<0.05）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫組化染色顯示近端結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有CAⅡ表達(dá)，半定量免疫印跡分析，兩組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

10、異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.AQP1/4可能是“肺病及腸”病理傳變中“肺津與腸津”關(guān)系的分子基礎(chǔ)之一；CAⅡ可能是肺主氣與“氣化作用”的分子基礎(chǔ)之一，至于CAⅡ在“肺病及腸”病理傳變中的意義有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　2.CAⅡ與AQP1/4可能是“肺病及腸”病理傳變中“肺氣與腸津”相關(guān)性的分子基礎(chǔ)之一。
　　3.本研究中兩組大鼠血漿、BALF及肺與近端結(jié)腸組織勻漿中VIP、SP含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，推測(cè)可能