天然Ⅱ型膠原蛋白抗關(guān)節(jié)炎功能研究.pdf

1、本文以豬鼻骨為原料，提取天然Ⅱ型膠原蛋白，并以堿性蛋白酶酶解獲得膠原肽。以天然Ⅱ型膠原蛋白和膠原肽為研究對(duì)象，分析天然Ⅱ型膠原蛋白和膠原肽的理化性質(zhì)，并對(duì)其在小鼠體內(nèi)抗關(guān)節(jié)炎作用機(jī)理進(jìn)行研究。課題的研究對(duì)于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防具有重要意義。
　　通過(guò)單因素試驗(yàn)及響應(yīng)面分析得到Ⅱ型膠原蛋白最佳提取工藝為:NaCl濃度為2.5 mol/L，提取時(shí)間為30h，提取溫度為15℃，蛋白提取得率為22.58％，膠原蛋白含量為82.86％，所提

2、膠原蛋白粗提物純度較高。通過(guò)對(duì)Ⅱ型膠原蛋白理化性質(zhì)測(cè)定，蛋白分子量大于300 KD，230 nm下有膠原蛋白特征吸收峰，符合膠原蛋白性質(zhì)。通過(guò)堿性蛋白酶酶解獲得膠原肽，膠原肽分子量小于20 KD，HPLC-MS分析顯示不存在末降解的大分子蛋白片段。
　　通過(guò)構(gòu)建CIA動(dòng)物模型，研究Ⅱ型膠原蛋白及其膠原肽的體內(nèi)抗關(guān)節(jié)炎作用得到以下結(jié)論:Ⅱ型膠原組小鼠關(guān)節(jié)指數(shù)為2，關(guān)節(jié)變形率為30％，膠原肽組小鼠關(guān)節(jié)指數(shù)為3，關(guān)節(jié)變形率為70％;Ⅱ型

3、膠原組小鼠關(guān)節(jié)軟骨破壞程度較低，膠原肽組關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)明顯退化。說(shuō)明口服Ⅱ型膠原能夠達(dá)到抗關(guān)節(jié)炎作用，膠原肽不具有此作用。
　　通過(guò)對(duì)給藥組小鼠免疫器官及免疫細(xì)胞研究得到以下結(jié)論:天然Ⅱ型膠原蛋白能夠顯著增加小鼠胸腺指數(shù)(P＜0.05)、降低小鼠脾臟指數(shù)(P＜0.05);提高巨噬細(xì)胞吞噬能力(P＜0.05)和淋巴細(xì)胞增殖能力(P＜0.05)，說(shuō)明其對(duì)免疫系統(tǒng)具有一定的保護(hù)和恢復(fù)作用。通過(guò)對(duì)小鼠血清中細(xì)胞因子的檢測(cè)，結(jié)果表明Ⅱ型膠原蛋