深度測序?qū)渭?xì)胞21-三體診斷的可行性研究.pdf

1、【背景】非整倍體是最常見的染色體異常,可導(dǎo)致胚胎停育與自發(fā)流產(chǎn),是限制試管嬰兒成功率的重要原因之一。胚胎植入前遺傳學(xué)篩查(preimplatation genetic screening,PGS)是篩選染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)正常的胚胎進(jìn)行移植,以此期望提高移植成功率與妊娠率。目前PGS技術(shù)主要包括:原位熒光雜交技術(shù)、比較基因組雜交以及微陣列比較基因組雜交和單核苷酸多態(tài)性芯片技術(shù)等,但各項(xiàng)技術(shù)均存在缺點(diǎn)。為了尋找一種更快速、全面檢測非整倍體的方

2、法,我們以二代測序技術(shù)為基礎(chǔ),嘗試一種新方法完成對單細(xì)胞21-三體的診斷,從而建立該技術(shù)平臺為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　【目的】初步建立深度測序技術(shù)在單細(xì)胞水平診斷21三體的技術(shù)平臺。
　　【方法】采用深度測序技術(shù)對正常女性外周血DNA進(jìn)行檢測,評估該方法檢測的穩(wěn)定性。對不同濃度DNA的21-三體樣本應(yīng)用多重置換擴(kuò)增方法進(jìn)行全基因組擴(kuò)增,對其產(chǎn)物進(jìn)行深度測序,評估該方法對21-三體診斷的可行性。利用深度測序技術(shù)對單細(xì)胞21-三

3、體樣本進(jìn)行檢測,初步建立深度測序方法檢測單細(xì)胞-21三體的技術(shù)平臺。
　　【結(jié)果】
　　1.采用深度測序方法對14例樣本進(jìn)行檢測,各染色體標(biāo)準(zhǔn)差均處于低水平,其中最大標(biāo)準(zhǔn)差為0.078。21-三體樣本21號染色體拷貝數(shù)是正常樣本21號染色體拷貝數(shù)的1.5倍,其余染色體與正常樣本相比未發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)的明顯異常。
　　2.cutoff值0.5、1、1.5分別代表單倍體、二倍體和三倍體,21-三體樣本測序結(jié)果顯示21號染色體cu