急性髓系白血病DNA甲基化相關基因突變檢測體系建立和臨床意義分析.pdf

1、目的:建立基于探針熔解曲線法的檢測DNA甲基化相關基因突變的PCR體系，了解DNA甲基化相關基因突變在急性髓系白血病(Acute myeloidleukemia，AML)患者中的發(fā)生率和類型，分析伴有DNA甲基化相關基因突變的患者的臨床特征和突變在AML中的預后價值。
　　 方法:利用重疊延伸法構建相應質粒，設計探針、引物，優(yōu)化檢測體系的相關參數，建立一種可快速檢測DNA甲基化相關基因突變的方法。
　　 收集133例急性

2、髓系白血病患者的骨髓標本，提取細胞RNA,逆轉錄成cDNA，采用所構建的檢測體系，對AML患者骨髓標本的cDNA進行IDH1，IDH2，DNMT3A基因突變檢測，且將陽性結果測序驗證。同時結合其它相關臨床資料，分析含有基因突變患者的臨床特征，進行統(tǒng)計學分析并評價基因突變對急性髓系白血病預后的影響。
　　 結果:利用探針熔解曲線技術，基于實時熒光PCR平臺，建立了多重的DNA甲基化相關基因突變的檢測體系，并運用此方法，檢測AML病

3、例標本，結果顯示，有5例AML患者被檢測出IDH1-R132突變，13例有IDH2突變，有7例檢測出DNMT3A-R882突變，突變形式均為錯義突變。IDH1基因突變在FAB各亞型中的M0發(fā)生率最高，IDH2在M1和M4的發(fā)生率較高，而DNMT3A則多發(fā)生于M1。IDH1突變的發(fā)生常伴有高白細胞數，IDH2的發(fā)生與高齡、高白細胞數、NPM1有關，DNMT3A基因突變則與高齡、高白細胞數、高血小板數、NPM1密切相關。IDH1突變陽性者在

4、正常核型的AML(CN-AML)中發(fā)生概率為6.3％，IDH2在CN-AML中發(fā)生率為16.7％，DNMT3A突變在CN-AML的發(fā)生率為10.4％，均高于在異常核型AML的發(fā)生率。
　　 結論:(1) IDH基因在AML中的總突變率為13.5％，其中IDH1突變率為3.8％， ID H2突變率為9.8％。DNMT3A-R882位點突變發(fā)生率為4.0％，突變發(fā)生率可能存在人種差異。(2) DNA甲基化相關基因與高白細胞數密切相關