TLR4 siRNA防治D-GalN-LPS誘導的小鼠急性肝損傷的實驗研究.pdf

1、由病毒性肝炎、酗酒、服用肝毒性藥物或其它多種原因所致的肝功能衰竭是臨床常見危重癥，每年發(fā)病數(shù)以百萬計。目前的綜合治療措施僅能使其病死率降至60％，而生物人工肝支持系統(tǒng)和肝細胞移植的應用雖然能夠進一步提高患者的生存率，但肝移植仍然是目前唯一能明顯改善患者預后的治療措施。由于供肝來源受限、手術費用昂貴以及術后須長期服用免疫抑制劑等，大部分患者還無法接受肝移植治療，尋找新的肝衰竭防治方法勢在必行。 腸源性內(nèi)毒素血癥在肝衰竭的發(fā)病機制中

2、扮演著重要的角色。肝衰竭動物模型和臨床研究表明內(nèi)毒素血癥和肝損傷有密切關聯(lián)。腸源性內(nèi)毒素血癥通常可導致過度的炎癥反應、肝壞死、肝臟炎癥加劇甚至肝功能衰竭。 內(nèi)毒素由脂多糖(LPS)和蛋白質(zhì)組成，LPS是內(nèi)毒素的主要活性成分，有著重要的病理生理功能。TLR4是LPS信號轉(zhuǎn)導的關鍵受體。調(diào)控TLR4的表達有可能控制LPS有關的炎癥反應。然而，目前支持此推論的體內(nèi)研究證據(jù)較少。因此，有必要進行體內(nèi)TLR4基因表達調(diào)控治療的研究。

3、 RNA干擾是轉(zhuǎn)錄后基因沉默的有力工具。本研究基于pSilencer 4.1-CMVneo siRNA表達載體，設計并構建了TLR4 siRNA表達載體。通過轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞評估其基因沉默效率，進一步在小鼠肝損傷模型中評價TLR4基因沉默的治療效果。 實驗結果如下： 1. 雙酶切及測序證實重組載體構建成功；體外實驗表明，RAW264.7細胞中TLR4 mRNA及蛋白水平均明顯降低；TLR4 siRNA明顯抑制

4、LPS 對TNF-α及MIP-2表達的上調(diào)作用，LPS對p38-MAPK及ERK1/2的活化作用亦被TLR4 siRNA顯著下調(diào)。 2. D-GalN/LPS聯(lián)合給藥前48小時及24小時TLR4 siRNA預處理可明顯降低ALT及AST的升高幅度，TNF-α及MIP-2的mRNA及細胞因子水平亦被抑制，TUNEL陽性肝細胞百分率下降。TLR4 siRNA預處理可明顯減輕D-GalN/LPS對C57BL/6小鼠的肝損害作用，降低