MicroRNA-375、MicroRNA-205在肺癌中的表達(dá)及相關(guān)靶基因的研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類(lèi)長(zhǎng)度約～22nt的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA。miRNA主要通過(guò)與靶基因mRNA堿基互補(bǔ)配對(duì)——通常為miRNA的5'種子序列(5'seed sequence)與mRNA的的3'非翻譯區(qū)(3'untranslated region，3'UTR)——在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)蛋白編碼基因的表達(dá)。miRNA通過(guò)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，參與發(fā)育分化、細(xì)胞增殖、凋亡等重要生命過(guò)程。越來(lái)越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中表達(dá)

2、失調(diào)，包括肺癌，提示miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。目前認(rèn)為miRNA對(duì)腫瘤進(jìn)程中的多個(gè)階段均有重要影響，包括原癌基因的激活與抑制，腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤血管生成，侵襲轉(zhuǎn)移等等。
　　肺癌一直是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤死亡原因。病理學(xué)分類(lèi)上主要將肺癌分為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLCs)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer，SCLCs)。不同病理學(xué)類(lèi)型的肺癌其治療手段也存

3、在差異。由于當(dāng)前對(duì)肺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究仍不夠深入，臨床的治療方法相對(duì)落后。因此有必要尋找新的分子標(biāo)記物，為肺癌的診斷和治療提供更有效的靶點(diǎn)，以期改善肺癌患者的預(yù)后。
　　本課題中，我們首先采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR，qRT-PCR)在207例肺癌和正常肺組織石蠟標(biāo)本中對(duì)microRNA-205(miR-205)和microRNA375(miR-375)的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，與正常肺組

4、織相比，miR-205在肺鱗癌(squamous cell lung carcinoma，SQ)中表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，而miR-375在SCLC中顯著上調(diào)(P＜0.05)。進(jìn)一步我們預(yù)測(cè)篩選二者的靶基因，采用miRecords靶基因預(yù)測(cè)軟件并結(jié)合KEGG信號(hào)通路數(shù)據(jù)庫(kù)，在22個(gè)肺癌相關(guān)信號(hào)通路中預(yù)測(cè)得到52個(gè)miR-205的候選靶基因，以及22個(gè)miR-375的候選靶基因。
　　考慮到miR-375在SCLC組織樣本中的

5、顯著上調(diào)，而當(dāng)前對(duì)miR-375相關(guān)的信號(hào)通路及其在肺癌中的研究相對(duì)較少，我們進(jìn)一步選擇miR-375作為更深入的研究對(duì)象。首先通過(guò)qRT-PCR在85例手術(shù)切除冰凍組織標(biāo)本中對(duì)miR-375的22個(gè)候選靶基因作驗(yàn)證，結(jié)果得到16個(gè)候選靶基因(ACSL3，F(xiàn)ZD8，ITGA10，ITPKB，LRP5, PIAS1,CACNG2, CCDC6,JUND, RYR2, CSNK2A1, MAP3K5, RUNX1, NLK, PDPK1,S

6、P1）在肺癌中的表達(dá)與正常肺組織中的表達(dá)相比具有差異。其中6個(gè)候選靶基因(FZD8，ITGA10，ITPKB，LRP5，PIAS1，RUNX1)mRNA的表達(dá)與miR-375的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，我們進(jìn)一步選擇這6個(gè)候選靶基因作后續(xù)的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
　　有意思的是，在3株SCLC細(xì)胞系(NCI-H345，H69，H82)中發(fā)現(xiàn)PIAS1蛋白的內(nèi)源性表達(dá)與miR-375的內(nèi)源性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。此外，miR-375可以抑制野生型PIAS1 m

7、RNA3，UTR的報(bào)告基因活性，而對(duì)結(jié)合位點(diǎn)突變的突變型PIAS13'UTR的報(bào)告基因活性沒(méi)有明顯影響，為證實(shí)PIAS1作為miR-375的靶基因提供了有力的依據(jù)。
　　綜上所述，本研究在肺癌患者中證實(shí)了miR-205這一SQ特異性分子標(biāo)記物以及miR-375這一SCLC特異性分子標(biāo)記物。miR-375通過(guò)作用于靶基因PIAS13'UTR，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)PIAS1的表達(dá)。這些結(jié)果提示miR-375在SCLC發(fā)病分子機(jī)制中具有重要