慢性胰腺炎的代謝特征分析.pdf

1、慢性胰腺炎(Chronic Pancreatitis,CP)是臨床較為常見的消化系統(tǒng)疾病之一,其發(fā)病率逐年增加。雖然近年來對慢性胰腺炎及其分級的研究取得了很大的進展,然而目前采用的診斷及分級標準多基于臨床表現(xiàn)、實驗室檢查及影像學表現(xiàn)等,缺乏從代謝層面對慢性胰腺炎不同病程階段的代謝特征進行分析,且對慢性胰腺炎的臨床分級沒有統(tǒng)一的標準。高分辨魔角旋轉(zhuǎn)核磁共振波譜(High-resolution Magic AngleSpinning Nuc

2、lear Magnetic Resonance Spectroscopy,HR-MAS NMR)是一種無創(chuàng)的離體組織代謝成分分析的方法,具有較高的靈敏度,可以較準確的分析組織內(nèi)各類化合物。本研究通過對不同時期慢性胰腺炎大鼠模型的建立,并對離體胰腺組織進行HR-MAS NMR實驗,探究慢性胰腺炎大鼠與正常大鼠代謝特征的差異、大鼠慢性胰腺炎不同時期的代謝特征變化以及病理學評分與特征代謝產(chǎn)物的相關(guān)性,結(jié)合病理結(jié)果,進一步探究HR-MAS NM

3、R在大鼠慢性胰腺炎代謝分析中的應(yīng)用價值。
　　 第一部分大鼠慢性胰腺炎代謝分級的初步探究
　　 目的:探究不同時期大鼠胰腺組織內(nèi)代謝產(chǎn)物變化特征,進一步探究HR-MASNMR在大鼠慢性胰腺炎(Chronic Pancreatitis,CP)分級的價值。方法:WISTAR大鼠36只,隨機分配并分為0、7、14、21、28、35天6個觀察時間點,每個時間點各6只大鼠。每組分別經(jīng)尾靜脈注入二丁基二氯化物(Dibutyltin

4、dichloride,DBTC)溶液(8mg/kg體重)。造模相應(yīng)的時間點后,開腹并剝離胰腺組織,大體觀察后,取小部分用于病理研究,由兩位病理學家對病理標本進行分級。大部分液氮冷凍后立即保存于-80℃,用于HR-MAS NMR實驗,進而得到各組的波譜圖及主要代謝產(chǎn)物相對強度的均數(shù)和標準差,進一步對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果:慢性胰腺炎模型病理分級可以分為輕度、中度及重度,且嚴重程度隨造模時間的推移逐漸增加；HR-MAS NMR主成

5、分分析表明重度慢性胰腺炎組大鼠能夠與對照組及輕度胰腺炎組進行很好的區(qū)分,胰腺代謝物中甜菜堿(Betaine,Bet),磷酸膽堿和甘油磷酸膽堿(Phosphocholine and Glycerophosphocholine,PC/GPC)、膽堿(Choline,Cho)及3-羥基丁酸(3-hydroxybutyrate,3HB)化合物含量明顯增多,而天冬氨酸鹽(Aspartate,Asp),乳酸(Lactate,Lac),脂肪酸(Fat

6、ty Acid,FA),異亮氨酸/亮氨酸/纈氨酸(Ileucine/Leucine/Valine,Ile/Leu/Val)的含量明顯減少。8種代謝產(chǎn)物的回歸分析提示最有鑒別意義的三種物質(zhì)為:Asp、Bet和FA。結(jié)論:HR-MAS NMR對區(qū)分正常胰腺、輕度慢性胰腺炎及重度慢性胰腺炎有幫助；最有鑒別意義的三種物質(zhì)為:Asp、Bet和FA；HR-MAS NMR可以作為一種有效的慢性胰腺炎診斷及分級的方法。
　　 第二部分大鼠慢性胰

7、腺炎的病理與代謝物的相關(guān)性分析
　　 目的:探尋慢性胰腺炎病理評分結(jié)果(炎細胞浸潤評分結(jié)果及纖維化評分結(jié)果)與HR-MAS-NMR特征代謝產(chǎn)物(Asp、Bet及FA)的相關(guān)性。方法:參照David J等方法,對前期(第一部分)20例慢性胰腺炎模型的病理學切片進行詳細評分,評定炎癥程度分級。分析并計算各組各實驗動物代謝產(chǎn)物天冬氨酸(Aspartate,Asp)、甜菜堿(Betaine,Bet)、脂肪酸(Fatty Acid,FA)

8、的積分面積。將各慢性胰腺炎實驗動物的炎細胞浸潤評分結(jié)果及纖維化評分結(jié)果分別與代謝產(chǎn)物Asp、Bet、FA的積分面積進行Spearman秩相關(guān)檢驗。結(jié)果:Bet與慢性胰腺炎纖維化的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為0.454,且p值為0.044<0.05,Bet與慢性胰腺炎炎細胞浸潤的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為0.716,且p值為0.000<0.01。Asp與慢性胰腺炎纖維化的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為-0.768,且p值為0.000<0.

9、01,Asp與慢性胰腺炎炎細胞浸潤的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為-0.394,而p值為0.085>0.05。FA與慢性胰腺炎纖維化的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為-0.764,且p值為0.000<0.01,FA與慢性胰腺炎炎細胞浸潤的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為-0.619,而p值為0.004<0.01。結(jié)論:慢性胰腺炎的纖維化程度及炎細胞浸潤程度與HR-MAS-NMR分析的代謝產(chǎn)物之間具有相關(guān)性。代謝產(chǎn)物Bet與慢性胰腺炎的纖維化及炎細