MicroRNA-1285靶向調(diào)控p53的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、p53介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生命活動中起重要作用。但是p53的調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜,很多機(jī)制尚不清楚。microRNAs(miRNAs)是一類內(nèi)源性表達(dá)的小分子非編碼RNA,能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。本項(xiàng)研究我們擬探討miRNAs對p53的調(diào)控。
　　首先,采用生物信息學(xué)預(yù)測軟件TargetScan預(yù)測可能調(diào)控p53的miRNAs。進(jìn)而通過高通量的熒光素酶檢測系統(tǒng)篩選候選的靶向p533'UTR的miRNAs。我們發(fā)

2、現(xiàn)p53能夠被miR-1285所調(diào)控。然而與miR-1285有著共同種子序列的miR-612,對p533'UTR熒光素酶報告載體卻沒有作用。
　　根據(jù)TargetScan軟件的預(yù)測,p53 mRNA3'UTR有兩個miR-1285結(jié)合位點(diǎn),其序列與成熟的miR-1285序列幾乎完全互補(bǔ)。我們構(gòu)建了含有突變位點(diǎn)p533'UTR的熒光素酶報告載體。熒光素酶檢測顯示,miR-1285對突變型熒光素酶活性的抑制沒有野生型顯著。這表明miR

3、-1285是通過與這兩個靶位點(diǎn)的結(jié)合而發(fā)揮靶向調(diào)節(jié)p53基因的作用。
　　將miR-1285模擬物或:RNA對照轉(zhuǎn)染MCF-7、SH-SY5Y和HepG三株p53野生型細(xì)胞系。結(jié)果表明外源性表達(dá)miR-1285可以抑制p53 mRN,A和蛋白水平的表達(dá)。SH-SY5Y細(xì)胞中miR-1285相對表達(dá)水平最高,將miR-1285反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞,結(jié)果顯示抑制miR-1285后p53的表達(dá)上調(diào)。
　　p21是p5