MicroRNA-1285靶向調控p53的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、p53介導的細胞信號轉導途徑在調節(jié)細胞正常生命活動中起重要作用。但是p53的調控機制非常復雜,很多機制尚不清楚。microRNAs(miRNAs)是一類內源性表達的小分子非編碼RNA,能夠在轉錄后水平調控基因的表達。本項研究我們擬探討miRNAs對p53的調控。
　　首先,采用生物信息學預測軟件TargetScan預測可能調控p53的miRNAs。進而通過高通量的熒光素酶檢測系統(tǒng)篩選候選的靶向p533'UTR的miRNAs。我們發(fā)

2、現(xiàn)p53能夠被miR-1285所調控。然而與miR-1285有著共同種子序列的miR-612,對p533'UTR熒光素酶報告載體卻沒有作用。
　　根據(jù)TargetScan軟件的預測,p53 mRNA3'UTR有兩個miR-1285結合位點,其序列與成熟的miR-1285序列幾乎完全互補。我們構建了含有突變位點p533'UTR的熒光素酶報告載體。熒光素酶檢測顯示,miR-1285對突變型熒光素酶活性的抑制沒有野生型顯著。這表明miR

3、-1285是通過與這兩個靶位點的結合而發(fā)揮靶向調節(jié)p53基因的作用。
　　將miR-1285模擬物或:RNA對照轉染MCF-7、SH-SY5Y和HepG三株p53野生型細胞系。結果表明外源性表達miR-1285可以抑制p53 mRN,A和蛋白水平的表達。SH-SY5Y細胞中miR-1285相對表達水平最高,將miR-1285反義寡核苷酸轉染SH-SY5Y細胞,結果顯示抑制miR-1285后p53的表達上調。
　　p21是p5

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