KZNF家族中p53選擇性調(diào)控分子的篩選與功能的研究.pdf

1、腫瘤抑制蛋白p53是調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)展及細(xì)胞凋亡發(fā)生的蛋白網(wǎng)絡(luò)的節(jié)點(diǎn)分子,作為重要的轉(zhuǎn)錄因子,在不同類型細(xì)胞應(yīng)激條件下,如DNA損傷、原癌基因激活、氧化應(yīng)激等,p53迅速激活在細(xì)胞內(nèi)積累,發(fā)揮周期阻滯或細(xì)胞凋亡的作用。一直以來,p53在不同的時(shí)間空間,如何感應(yīng)不同的細(xì)胞刺激被精細(xì)的調(diào)控是研究者力圖解決的重要問題,尤其 p53選擇調(diào)控領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注。p53選擇調(diào)控分子如Hzf、hCAS/CSE1L、ASSP家族的鑒定與功能的研究,為

2、闡明p53發(fā)揮特異調(diào)控機(jī)制提供了新的機(jī)制。
　　本課題組鑒定了一種p53新的負(fù)調(diào)控分子,Apak（ATM and p53 associated KRAB-containingzinc finger protein,也稱ZNF420),能夠選擇性的下調(diào)p53凋亡相關(guān)靶基因的表達(dá),抑制p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,而對細(xì)胞周期阻滯及其它p53參與生理功能沒有調(diào)控作用。Apak通過與其轉(zhuǎn)錄抑制輔助因子KAP-1（KRAB-associated

3、protein-1)相互作用,募集 ATM（ataxia-telangiectasia mutated protein)、HDAC1(histone deacetylase1)形成作用復(fù)合體,共同發(fā)揮對p53的調(diào)控功能。Apak屬于KRAB型鋅指蛋白(KRAB-containingzinc finger protein,KZNF),是哺乳動(dòng)物中最大的轉(zhuǎn)錄因子/轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子家族。此家族最大的特點(diǎn)是具有相似的結(jié)構(gòu)與相同的功能機(jī)制,我們將尋找

4、 p53選擇性調(diào)控分子擴(kuò)展到Apak所處的整個(gè)KRAB型鋅指蛋白家族。
　　我們首先調(diào)取了人類基因組存在的423種 KZNF基因,利用生物信息學(xué)方法分析具有一定潛在特征(如,類似Apak,氨基酸序列中含有典型的ATM磷酸化位點(diǎn):SQ/TQ序列)一組的KZNF家族分子,進(jìn)行克隆并確證其表達(dá),檢測它們對p53轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)作用及與p53的結(jié)合能力,從而篩選出既抑制p53活性也可結(jié)合p53的成員,對這些成員檢測其對p53靶基因的選擇性調(diào)

5、控,最后對篩選出來的選擇調(diào)控性分子作功能的驗(yàn)證。
　　我們鑒定出15個(gè)可抑制p53活性的分子,21個(gè)與p53相互作用成員,選取對p53抑制功能與p53結(jié)合能力一致的分子,共14個(gè),分析其對p53靶基因的選擇性調(diào)控,從中我們篩選到 ZNF8可選擇性的調(diào)節(jié)血管生成靶基因 TSP1;ZNF498選擇性調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)靶基因Puma、p53AIP1。我們對篩選出來的分子ZNF8、ZNF498在分子和細(xì)胞學(xué)水平對其參與的p53相關(guān)生命過程作